大豆疫霉菌原生质体制备与再生菌株的生物学性状.pdf

维普资讯 南京农业大学学报 2005，28 (4)：45—49 JournalofNanjingAgriculturalUnweuity 大豆疫霉菌原生质体制备及再生菌株的生物学性状 陈孝仁，王源超 ，张正光，郑小波 (南京农业大学农业部病虫监测与治理重点开放实验室，江苏 南京 210095) 摘要：为了建立聚乙二醇 (PEG)介导的大豆疫霉菌的遗传转化系统，对大豆疫霉菌原生质体的制备条件及再生菌株的 生物学性状进行了研究。结果表明：Driselase以及 Driselase和Lysing酶的混合液均能有效地裂解菌株Pmg2-3的细胞壁 并获得原生质体；其中混合酶液的裂解效果优于Driselase单一酶液，当混合酶液中两个酶的浓度均为 15mg·mL 时， 在3Occ消化3h可产生4×10mL 的原生质体。所制备的原生质体经细胞核染料4，6-diamidino一2一phenyl—indole(DAPI) 染色后发现，大型均一的原生质体内含有细胞核；原生质体在再生培养基上再生率达 1．0％，再生菌株在利马豆培养基 上菌落形态呈白色、圆形、毛毡状，其生长速率、致病性均与亲本菌株保持一致。 关键词：大豆疫霉菌；原生质体；再生菌株；致病性 中图分类号：Q939．5 文献标识码：A 文章编号：1000—2030 (2005)04—0045—05 ProtoplastpreparationofPhytophthorasojaeandbiological characterizati0n ofregeneratedcells CHENXiao—ren，WANG Yuan—chao ，ZHANGZheng—guang，ZHENG Xiao—bo (KeyLaboratoryofMonitoringandManagementofPlantDiseasesandInsects，Ministry ofAgriculture， NanjingAgriculturalUniversity，Naming210095，China) Abstract：ToestablishtransformationsystemofPhytophthorasojae，wepreparedprotoplastsofthewell—studiedstrainPmg2-3of theoomyceteandinvestigatedbiologicalchraactersofregeneratedstrains．Protoplastsof4 ×10 mL一ofosmoticawereproducedby digestingthecellwallfor3hat30oCwith15mg-mL～ solutionofDriselaseandLysingenzyme，whichprovidedbettereffectthan Driselaseusedsingly．Nucleiofthegeneratedprotoplastswereobservedbyfluorescencemicroscope．Nucleiwerefoundinthefully developedandunifomr protoplasts．Regenerationwasmadeatarateof1．0％ inthemedium appliedwith 1otol ·L～ mannito1． Regeneratedstrainsthatformed ay，orbicular，andfehycoloniesgrew onthemedium andshowedpathogenicitytothehostplant similarlyasdidtheirpraent． Keywords：Phytophthorasojae；protoplast；regeneratedstrain；pathogenicity 由大豆疫霉菌 (Phytophthoras咖eKaufmann＆Gerdemann)引起的大豆疫霉根腐病 (phytophthora rootrotofsoybean)是大豆生产上的毁灭性病害之一_l