原生质体融合技术选育香菇菌株.pdf

育 种 驯 化 diblefungi 2012 （4 ） 原生质体融合技术选育香菇菌株 邢振楠 臧海莲 李滇华 郭 兴 （伊春林业科学院，黑龙江伊春 153000） 缓冲液中，即得纯化原生质体。 摘 要 利用真菌原生质体融合技术，以香菇（Lentinulaedodes） 为研究对象，酯酶同工酶作为遗传标记，应用正交试验对酶解反 1.6 原生质体融合 将原生质体以1∶1的比例混合，渗透 应的温度、时间、pH以及酶浓度进行筛选。通过酯酶同工酶电泳 压稳定剂洗脱混合液2次，并得到原生质体沉淀；用缓冲 法与拮抗实验，确立新香菇菌株4株，结合小兴安岭地区气候条 液（0.05 mol/LCaCl ，0.05 mol/L 甘氨酸，pH7.5）稀释原生质2 件，L1、L5为适宜小兴安岭新菌株。 体，振动管壁促使原生质体混合均匀，加入1mL助融剂PEG 关键词 原生质体 酯酶同工酶 正交试验 悬浮原生质体，26℃保温20~30min后，立即逐滴加入1mL缓 文章编号 1000-8357（2012）04-0016-03 冲液，促进融合；融合终止后，4000r/min离心10min得到原 近几年，小兴安岭地区香菇栽培规模不断扩大，所选用 生质沉淀，稳渗剂洗脱2次；沉淀用含0.6mol/L甘露醇的基本 的菌种均由南方引种而来，由于小兴安岭地区与引种地区在 培养基稀释10个/mL。5 气候、栽培模式上的差异，导致大部分香菇菌种丧失了本来 1.7 原生质体再生 将1mL纯化后的原生质体，26℃静止 的特点，菌种的选育工作就显得尤为重要。小兴安岭地区野 培养，每天轻轻摇动2次，并每天镜检2次。在原生质体出现 生香菇资源匮乏，给香菇的育种带来一定困难。研究以在小 巨大化时，取5mL原生质体缓缓注入预先装有4mol/LNaCl 兴安岭地区多年栽培的香菇菌种为亲本菌株，利用原生质体 溶液的离心管底部，2000r/min，离心10min，重复3次，离心 融合技术，选育适合小兴安岭地区栽培的香菇菌株，以期对 后吸取液面交界处的原生质体。加入适量的液体再生培养 小兴安岭香菇的栽培起到一定的促进作用。 基，摇床培养24h后，取200 μL在固体再生培养基涂平板。 1.8 融合子检出策略 将所有融合子与亲本进行拮抗实 1 材料与方法 验，拮抗实验是鉴定菌株间遗传差异的传统方法，菌株间的 1.1 供试菌株及来源 研究中的香菇商业栽培菌株2206、 拮抗反应是菌株间不同遗传特性的重要表现。 2205、135、L26、939、L109、396、908、856均由自伊春原生态食 1.9 栽培试验 用菌研究所购入、分离、保存。经过酯酶同工酶电泳法分析， 1.9.1 小 试 4个供试菌株，每株制作栽培种30袋，3组 选择了亲缘关系较远的135与396为亲本，进行杂交。 重复试验。 1.2 仪器设备 TGL-16台式高速离心机、多功能凝胶成像 1.9.2 中 试 4个供试菌株，每株制作栽培种1000袋，3 仪、HH-2数显恒温水浴锅、DYY-10C微电脑控制电泳仪、 组重复试验。 BA300生物显微镜、GilsonP型移液器2~20