原生质体融合选育富硒高产灵芝的探究.pdf

育 种 驯 化 2012 （3 ） diblefungi 原生质体融合选育富硒高产灵芝的研究 1 2 1 1 1 1 全卫丰 何静霞 汪 洁 刘广建 季宏更 薛璟 （1江苏省苏微微生物研究有限公司江苏无锡214063；2无锡五芝源农业生物科技有限公司 江苏无锡214000） 摘 要 以两株不同性状的灵芝菌株为亲本，采用化学融合方法 1 材料与方法 对其进行原生质体融合选育，筛选与亲本酯酶同工酶酶谱存在显 著差异和拮抗试验呈阳性的融合菌株，并分别以液体发酵菌丝生 1.1 灵芝菌株 灵芝赤芝美大（RG1101）、惠州（RG1102） 物量、富硒液体培养菌丝体中硒含量和固体栽培时子实体生物转 等。江苏省苏微微生物研究有限公司菌种保藏室。 化率和灵芝菌株的富硒能力为初筛和复筛标准，经遗传稳定性试 1.2 试剂与设备 PEG（聚乙二醇）、蔗糖、CaCl 、溶壁酶（广2 验验证，筛选到了一株灵芝高产菌株RG1108，编号为YG1，其灵 东省微生物研究所），其它略。 芝子实体生物转化率、固体富硒栽培灵芝子实体和孢子粉中的硒 Vertical Electrophoresis System Amersham PlarmaciaBio⁃ 含量分别较对照提高了 18.48%、21.78%、16.19%，遗传性状稳 techABUSA；CRY.3型细胞融合仪：宁波新芝科技股份有限 定。结果表明：原生质体融合选育富硒高产灵芝是一种比较成功 公司；YJ超净工作台：苏州市苏净集团安泰公司；生物显微 的灵芝育种手段。 镜 ：奥林巴斯C40；16M高速台式冷冻离心机：长沙湘仪离 关键词 原生质体融合，富硒，灵芝，育种 心机仪器有限公司；涡旋混匀仪。 文章编号 1000-8357（2012）03-0019-03 1.3 培养基配方 ①PDA液体培养基：马铃薯200g（煮后 灵芝则是我国中药和传统食疗宝库中的珍品，具有广泛 取汁），葡萄糖20 g，MgSO 0.5 g，KHPO 1.0 g，琼脂1.5 g，水4 2 4 [1] 的药理活性 ，对人体免疫系统、心血管系统、呼吸系统、神经 1000mL，pH 自然，玻璃珠适量。②RM4再生培养基：麦芽糖 [1] 系统等具有明显的调节作用 ，食补、药用的历史已有两千多 5 g，葡萄糖10g，酵母粉4 g，0.6 mol蔗糖，琼脂5.5 g、pH 自 年。利用灵芝作为富硒的载体，将无机硒转化为在毒理安全 然，蒸馏水定容至总体积为l000mL。③液体摇瓶培养基配 [2] 性、生理活性和吸收率上更优越的