小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的体外实验及nesprins在此分化过程中的表达的开题报告.docx

小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的体外实验及nesprins在此分化过程中的表达的开题报告 背景 小鼠胚胎干细胞（mouse embryonic stem cells, mESCs）是一种多能干细胞，可以分化为各种不同的细胞类型，包括心肌细胞。因此，mESCs被广泛应用于研究心脏发育和疾病，包括心肌病。在mESCs分化为心肌细胞的过程中，许多转录因子和信号通路被激活或抑制，使其先后表达心脏前体细胞标记物和心肌标记物，从而保证了正常的心肌发育。 在细胞分化过程中，细胞骨架的重组和细胞核的定位对于向正确的方向分化至关重要。细胞骨架与细胞核膜之间的连接由nesprins调节，nesprins是一类跨膜蛋白，与仓鼠变异体SUN（Sad1p and UNC84）蛋白结合形成LINC复合物（linker of nucleoskeleton and cytoskeleton complex）。有研究发现，Nesprin2在胚胎发育过程中具有重要作用，然而，在mESCs分化为心肌细胞的过程中，nesprin是否表达和它的作用尚不清楚。 目的 本研究旨在通过体外实验，考察mESCs分化为心肌细胞的过程，以及nesprins在此过程中的表达和作用。 方法 首先，采用基因工程技术制备mESCs株，使其表达心肌细胞标记物。然后，在细胞分化过程中，利用Western blot分析和实时定量PCR分析，检测心肌特异性蛋白质的表达和心肌标记物基因的转录水平。同时，通过免疫荧光染色和原位杂交检测mESCs分化为心肌细胞的形态变化和细胞核的定位。最后，利用Western blot和实时定量PCR分析，探究nesprins在mESCs分化为心肌细胞的过程中的表达和作用。 预期结果 预计本实验能够成功制备表达心肌细胞标记物的mESCs株，并成功分化为心肌细胞。同时，预计心肌特异性蛋白质的表达和心肌标记物基因的转录水平将逐步上升。在分化过程中，预计mESCs整体形态将发生变化，细胞核将定位到细胞中心。在nesprins方面，预计nesprin2将在心肌细胞分化过程中表达，并调节细胞核的定位。 意义 本研究将有助于进一步了解mESCs分化为心肌细胞的分子机制和nesprin在其中的作用，有望为心脏疾病的治疗提供新思路和新手段。