第四章生物化学与分子生物学技术实践.ppt

(1)在获得单链模板的方式上,PCR扩增与体内DNA复制不同,前者通过 　　　　　　解开双链,后者通过　　　　　　解开双链。 (2)据图分析,胎儿的基因型是　　　　　(基因用A、a表示)。患儿患 病可能的原因是　　　　　　　的原始生殖细胞通过　　　　　　　　过程产生配子时,发生了基因突变;从基因表达水平分析,其患病是由 于? 　。 【解题指南】(1)题干关键信息:突变序列的扩增片段可用一种限制酶酶切为大小不同的两个片段m和s,但正常序列的扩增片段不能被该酶酶切。 (2)题干隐含信息:不同片段经电泳后位置不同。 (3)图中隐含信息:胎儿既有正常序列,也有突变序列。 【解析】(1)PCR是体外扩增DNA的方式,通过高温使双链解开,体内DNA的复制则是通过解旋酶使DNA双链解开。 (2)由题意可知重型β地中海贫血症是隐性遗传病,突变后的序列可以被剪切成m和s两个片段,而正常序列无法被剪切,因此母亲、父亲、患儿和胎儿的基因型分别为AA、Aa、aa和Aa。母亲和父亲的基因型为AA和Aa,生下患儿可能是因为母亲的原始生殖细胞通过减数分裂产生配子时发生了基因突变。由图可知,该突变为由模板链上的GTC突变成ATC,mRNA上由CAG变成UAG,因此终止密码子提前出现,使翻译提前终止。 答案:(1)高温　解旋酶 (2)Aa　母亲　减数分裂　mRNA上编码第39位氨基酸的密码子变为终止密码子,β链的合成提前终止,β链变短而失去功能 【延伸探究】电泳法只能分离蛋白质分子吗?试分析原因。 提示:不是。电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程,该方法除用于分离蛋白质外,也可用于分离大小不等的DNA片段等。 【加固训练】 1.下图中能够表示相对分子质量不同的两种蛋白质在凝胶色谱柱中的行进过程的是(　　) 【解析】选B。相对分子质量较大的蛋白质只能从凝胶颗粒间隙通过,路程短,速度快,先到达色谱柱的下端;相对分子质量较小的蛋白质可进入凝胶颗粒内部的通道,路程远,速度慢,后到达色谱柱的下端。 2.(2014·泰州模拟)下列有关提取和分离血红蛋白的叙述中,不正确的是(　　) A.样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液 B.通过透析可以去除样品中相对分子质量较大的杂质,此为样品的粗提取 C.可以通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去,即样品的纯化 D.可以通过SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度 【解析】选B。样品处理是洗涤红细胞,使血红蛋白释放出来,通过离心法得到血红蛋白溶液。透析袋能使小分子自由进出,大分子留在袋内,这样可以去除样品中相对分子质量较小的杂质。当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时,这些蛋白质分子就可以分离开。判断纯化的蛋白质是否达到要求,通常用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法对蛋白质的纯度进行鉴定。 考点二 比较细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR) 体外迅速扩增 边解旋边复制, 半保留复制 特点 无转录,需加入 两种引物 伴有转录,产生引物 是否有 转录 耐高温的 TaqDNA聚合酶 解旋酶、 DNA聚合酶 酶 不需ATP提供能量 ATP提供能量 能量 细胞外 细胞内 场所 不 同 点 PCR扩增 DNA复制 项　目 都需要与模板相结合的引物 引物 DNA为模板 模板 严格遵循碱基互补配对原则 复制原理 四种脱氧核苷酸 原料 相 同 点 严格控制温度变化 的温控设备 无 设备 需要人为控制 不需要 缓冲液 30多次 受生物体自身控制 循环次数 不 同 点 PCR扩增 DNA复制 项　目 【高考警示】PCR技术操作的四个注意事项 (1)要进行灭菌操作:为避免外源DNA等因素的污染,PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。 (2)移液器枪头每用一次必须更换:在微量离心管中添加反应成分时,每吸取一种试剂后,移液器上的枪头必须更换。 (3)要确保反应液集中在离心管底部:所有的成分都加入后,盖严离心管口的盖子,用手指轻轻弹击管的侧壁,混匀后离心处理。 (4)要确保反应成分用量的准确性和程序设置的正当性:用量不当、漏加成分、PCR程序设置不当等,均有可能导致DNA片段扩增的失败。 第四章　 生物化学与分子生物学技术实践 【考纲考情】 2014江苏,2013江苏,2013广东, 2013北京,2012江苏,2012新课标全国卷,2012山东 1.蛋白质的提取和分离 2.PCR技术的基本操作和应用 三年考情 考纲要求 【知识梳理】 一、蛋白质的分离与纯化 1.分离蛋白质的方法:___________、薄膜透析法、___________和 电泳法等。 离心沉降法 凝胶色谱法 2.血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳: (1)原理:血清蛋白包括清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球