n胃癌蛋白质组学研究中双向凝胶电泳技术的优化.pdf

上 海 交 通 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) ( ) ·1603 · Vo l. 28 N o. 12 D ec. 2008 Journal of Shanghai J iaotong U n iversity M edical Science 文章编号 : 　0258 - 5898 (2008) 12 - 1603 - 04 ·技术与方法 · 胃癌蛋白质组学研究中双向凝胶电泳技术的优化 1 2 2 2 1 1 2 李 　炜 , 　李建芳 , 　蔡 　劬 , 　瞿 　颖 , 　孔 　雷 , 　秦建民 , 　刘炳亚 ( 1. 上海中医药大学 普陀医院普外科 , 上海 　200062; 2. 上海交通大学 医学院瑞金医院外科 上海消化外科研究所 , 上海 200025) 摘 　要 : 目的 优化应用于胃癌蛋白质组学研究的双向凝胶电泳技术 。方法 利用双向凝胶电泳技术分离正常胃黏膜和 胃癌组 ( ) 织中的蛋白质 。比较不同蛋白提取方法 机械匀浆 + TCA 沉淀法 ,碾磨 +丙酮 / TCA 沉淀法 、不同最高聚焦电压 、不同样本上样 量以及不同 pH 值范围固相 pH 梯度胶条对双向凝胶电泳结果的影响 。结果 机械匀浆 + TCA 沉淀法得到的蛋白质点较多 ,但电 泳图谱中出现大量横纹 ,对电泳图后期分析的干扰相对严重 ;碾磨 +丙酮 / TCA 沉淀法则能达到最高聚焦电压 ,上样量少 ,使用 pH 58 固相 pH 梯度胶条获得可分辨的蛋白质点数最多且效果较好 。结论 对 胃癌组织 、正常胃黏膜组织的全蛋白抽提方法和 电泳条件进行了优化 。 关键词 : 胃癌 ; 　双向电泳 ; 　蛋白质组学 中图分类号 : Q 503; 　R 735. 2　　　　文献标志码 : B 　　双向电泳 、生物质谱技术和生物信息学是蛋 白 脲 , PM SF ( Sigm a) ; Tris ba se, SD S ( Prom ega) ;甘氨酸 , [ 1 ] 硫代硫酸钠 , ED TA ,醋酸钠 。 质组学研究的三大支柱 。1975 年 , O ′Farrell 率先 利用双向凝胶 电泳技术进行蛋 白质混合物的分离 。 1. 1. 2 　仪器和软件 : PROTEAN IEF Cell等电聚焦 在双向凝胶电泳中 , 蛋 白质首先根据等电点的不同 仪 , PRO TEAN P lu s M u ltiCa sting Chamber 制胶槽 , 在一向等电聚焦电泳中分离 ,接着转移到二向 SD S - PROTEAN P lu s Dodeca Cell 电泳仪 , PRO TEAN Ⅱ xi TM 聚丙烯酰胺凝胶上 ,根据相对分子质量大小被分离 。 V ertical E lectrop hore sis Cells 垂直 电泳仪 , F luorS Bjellgvist等 [ 2 ] 发展并完善了固相 pH 梯度等电聚焦 M u ltim ager凝胶图像扫描仪 , PDQue st 7. 1. 1 2D 胶分