产外切葡聚糖酶真菌的筛选鉴定及毕赤酵母中的表达-微生物学报.PDF

微生物学通报 Apr. 20, 2014, 41(4): 629635 Microbiology China © 2014 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.130325 研究报告 产外切葡聚糖酶真菌的筛选鉴定及毕赤酵母中的表达 1 1,2 1 1 1* 1 1 1 唐自钟 刘姗 韩学易 晋海军 陈惠 刘默洋 单志 吴琦 (1. 四川农业大学 生命科学与理学院 四川 雅安 625014) (2. 攀枝花学院 生物与化学工程学院 四川 攀枝花 617000) 摘 要：【目的】外切葡聚糖酶是纤维素酶组分中一类对结晶纤维素有降解作用的酶类，如何 提高外切葡聚糖酶活力是研究的关键问题。【方法】从筛选鉴定得到的一株产外切葡聚糖酶酶 活较高的黑曲霉Asp-524 菌株出发，通过PCR 技术克隆得到外切葡聚糖酶基因序列，生物学信 息分析后，构建了毕赤酵母诱导型表达载体，实现了该基因在毕赤酵母中的成功表达。【结果】 抗性筛选得到的阳性转化子，用终浓度为 1%甲醇诱导5 d 后，酶活达到4.74 U/mL 。酶学性质 分析显示重组外切葡聚糖酶最适pH 为5.0 ，pH 稳定性分析显示在pH 为4.0−6.0 范围内相对稳 定，酶活能保持在最高酶活力的80%以上，最适反应温度为50 °C ，经60 °C 保温 1 h 后，酶活 仍能保持80%以上。【结论】结果说明该外切葡聚糖酶具有较好的热稳定性和pH 稳定性，这一 研究为纤维素酶的实际应用奠定了一定基础。 关键词：黑曲霉Asp-524 ，外切葡聚糖酶，毕赤酵母，菌种鉴定 Screening and identification of exo-1,4-β-D-glucannase-producing fungi, and its expression in Pichia pastoris TANG Zi-Zhong1 LIU Shan 1,2 HAN Xue-Yi 1 JIN Hai-Jun 1 CHEN Hui 1* LIU Mo-Yang 1 SHAN Zhi1 WU Qi 1 (1. College of Biology and Science, Sichuan Agricultural University, Ya’an, Sichuan 625014, China) (2. Department of Biological and Chemical Engineering, Panzhihua University , Panzhihua, Sichuan 617000, China) Abstract: [Objective] Exoglucanases is a class of cellulase which could degradation crystalline cellulose. Nowadays, how to improve the exoglucanase activity is of importance. [Methods] In this study, strain ASP-524, possessing higher level