生物化学与分子生物学进展：目的基因和基因载体.pdf

该文档是极速PDF编辑器生成， 如果想去掉该提示,请访问并下载： / 分 目的基因 基因载体 切 接 重组体 转 筛 表 基因载体 目的基因 质粒 噬菌体 病毒 PCR cDNA 人工合成 基因文库 限制性内切酶 有切口的载体 有切口的目的基因 DNA 连接酶 重组体 转化 转染 体外包装 带重组体的宿主细胞 表型筛选 电泳法 核酸杂交 免疫学方法 目的基因的表达 引物设计： （1)序列应位于高度保守区,与非扩增区无同源序列。 （2）引物长度以15-40 bp为宜。 （3）碱基尽可能随机分布,G+C占50-60%。 （4）引物内部避免形成二级结构。 （5）两引物间避免有互补序列。 （6）引物3’端为关键碱基；5’端无严格限制。 3’ 5’ 5’ 3’ 限制性内切酶的识别序列 启动子序列 定点突变 探针标记 1 目的基因的获取 需要克隆的DNA片段： cDNA文库 化学合成法 聚合酶链式反应 基因组DNA文库 1）化学合成法： PCR引物 测序引物 定点突变 核酸杂交探针 2 ）基因文库 基因组DNA 限制性 内切酶 …… 克隆、转化、培养、鉴定 基因文库 基因组DNA 文库 基因组DNA 限制性内切酶 基因重组 体外包装 转化细菌 cDNA 文库的组建：