分析化学高效液相色谱—HPLC.ppt

第8章 高效液相色谱法 HPLC High Performance Liquid Chromatography; §8.1 高效液相色谱仪 四大部分组成： 溶剂输送系统（贮液器，高压泵） 进样系统（进样阀等） 分离系统（色谱柱等） 检测记录系统（检测器，记录仪等） ;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;1. 高压输液泵 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性;2. 进样装置;3. 分离系统 包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。 色谱柱一般用内部抛光的不锈钢制成。其内径为2 ~ 6mm，柱长为10 ~50cm，柱形多为直形，内部充满3～10 mm高效微粒固定相。柱温一般为室温或接近室温 匀浆法填充柱： 将填料制成悬浮液，在高压泵的作用下压入装有洗脱 液的色谱柱。理论塔板数可达8万/米 ;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;4. 检测器 要求: 灵敏度高，噪音低，线形范围宽，响应快, 对温度和流速的变化不敏感 两种类型 溶质型检测器： 仅对被分离组分的物理或理化性质响应 如紫外，荧光，二极管阵列，电化学检测器 总体型检测器: 对试样和洗脱剂均有响应 如示差折光，介电常数检测器 ;UV检测器最常用，占70％ 池体积: 1～10μL 光程常: 2～10 mm 波 长: 254 nm 窗 口: 石英 ;折光计由测量池和参比池组成（示差折光计）; 伏安计、安培计、库仑计和电导计等, 首选安培计 可用于在工作电极的工作电压范围能还原或氧化的物质 电极表面易中毒 ;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;5. 梯度洗脱 分配比 k ???差很大的复杂混合物用一种溶剂很难完全分开 可采用两种或两种以上极性不同但可以相互溶解的溶剂，随时间按一定比例混合，连续改变洗脱剂的极性,离子强度或pH，以便改变被测组分的相对保留值，达到提高分离效果，缩短分析时间的目的;梯度洗脱装置分为两类： 外梯度装置（又称低压梯度），流动相在常温常压下混合，用高压泵压至柱系统，仅需一台泵即可。 内梯度装置（又称高压梯度），将两种溶剂分别用泵增压后，按电器部件设置的程序，注入梯度混合室混合，再输至柱系统。 梯度洗脱的实质：通过不断地变化流动相的强度，调整混合样品中各组分的 k 值，使所有谱带都以最佳平均 k 值通过色谱柱。 它在LC中所起的作用相当于GC中的程序升温： 通过改变溶质的极性、pH值和离子强度来调节溶质的k值，在GC中借程序调节温度改变k值。;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;§8.2 几种常见的液相色谱形式;1. 液液色谱（分配色谱） 1941年Martin发明: 用吸着在硅胶上的水作为 固定相，用氯仿为流