分析化学高效液相色谱-HPLC.ppt

2.液固色谱(吸附色谱)分离原理固定相为固体吸附剂，被分离组分在固定相上的吸附作用不同来进行分离的固体相:极性的硅胶，Al2O3,MgSiO3等硅胶柱的柱效高，容量大，最常见流动相“相似相用”:如极性大的组分选用极性强的洗脱剂，否则不易被洗脱。洗脱液的极性可用溶剂强度参数e表征，e越大，极性越强应用分离极性不同的化学物,同分异构体不适用同系物的分离3.离子交换色谱1975年H.Small发明,现为发展最快的分支分离原理:离子交换树脂为固定相,试样中的离子与离子交换树脂上的离子发生离子交换反应平衡常数K=﹝-NR4+X-﹞﹝Cl-﹞/﹝-NR4+Cl-﹞﹝X-﹞K越大,溶质的离子与离子交换剂的相互作用愈大,保留值愈大磺酸型阳离子交换树脂,阳离子的保留值大小:一价阳离子：Cs+Rb+K+NH4+Na+H+Li+二价阳离子：Ba2+Pb2+Sr2+Ca2+Cd2+Cu2+Zn2+Mg2+强碱性阴离子交换树脂,保留值大小顺序:PO43-SO42-C2O42-I-HSO4-NO3-CN-NO2-Cl-HCOO-OH-F-CH3COO-H2O、H2O+乙醇、H2O+pH缓冲剂流动相无机离子,有机和生物酸碱。如氨基酸、核酸、蛋白质等应用01sizeexclusionchromatographySEC4.尺寸排阻色谱法02gelfiltrationchromatgraphyGFC凝胶过滤色谱:水为流动相03gelpermeationchromatographyGPC1959年?Porath和Flodin发明分离原理:试样分子的尺寸和形状不同来实现分离凝胶渗透色谱:非水流动相GPC01流动相:水、四氢呋喃02应用:聚合物的分级03生物聚合体（蛋白质，核酸，低聚糖,04多肽）的分离05了解样品的有关性质样品的相对分子质量的大小在水中和有机溶剂中的溶解度、极性和稳定程度化学结构熟悉各种色谱方法的主要特点及其应用范围8.3色谱分离方法的选择1.流动相种类与极性液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂它可显著改变组分分离状况选择流动相在液相色谱中特别重要按极性可分为：极性、弱极性、非极性；按使用方式可分为：固定组成淋洗和梯度淋洗按组成可分为：单组分和多组分；己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间常用溶剂:STEP4STEP3STEP2STEP1尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化硅固定相等。试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。选择流动相时应注意的几个问题：特点：高压、高效、高速高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。第8章高效液相色谱法HPLCHighPerformanceLiquidChromatography8.1高效液相色谱仪四大部分组成：溶剂输送系统（贮液器，高压泵）进样系统（进样阀等）分离系统（色谱柱等）检测记录系统（检测器，记录仪等）1.高压输液泵主要部件之一，压力：150～350×105Pa01为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一01应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性012.进样装置流路中为高压力工作状态通常使用耐高压的六通阀进样装置1包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。色谱柱一般用内部抛光的不锈钢制成。其内径为2~6mm，柱长为10~50cm，柱形多为直形，内部充满3～10mm高效微粒固定相。柱温一般为室温或接近室温3.分离系统将填料制成悬浮液，在高压泵的作用下压入装有洗脱液的色谱柱。理论塔板数可达8万/米匀浆法填充柱：2要求:灵敏度高，噪音低，线形范围宽，响应快,对温度和流速的变化不敏感