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仪器分析实验报告

实验名称：HPLC高效液相色谱分析实验

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姓名：学号

指导教师：

日期：2013-5-15

一、实验目的

1.了解HPLC的结构，了解仪器的开、关程序；

2.了解流动相的制备和样品溶液的制备；

3.知道仪器设备的运行程序的进行样品分析。

二、实验原理

液相色谱由泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，试剂瓶

中的流动相被泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱

柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相

对运动，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较

大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转

换成电信号传送到记录仪。

三、仪器与试剂

仪器：美国安捷伦1200型HPLC、10μL的微量注射器

试剂：乙腈、重蒸水、磷酸、氰基布络芬

四、实验步骤

1.流动相的准备

流动相只有一组：氰基布络芬，经过脱气。

2.开机，色谱柱平衡

当1完成后，开机，特色谱柱平衡。

3.样品溶液的准备

配置好氰基布络芬溶液，按要求选好滤纸的孔径大小。用低压过滤装置过滤，

由于美国安捷伦1200型HPLC配有脱气装置，因此滤液无需事先脱气就可

以进行分析。

4.基线的查看

由于仪器内部压力的变化可以引起基线的不断波动，因此，需等待压力稳定

后，基线平稳才能进行进样。

5.样品进样分析

用25μL的微量注射器取20μL的氰基布络芬，微量注射器中不能有气泡，将

微量注射器的针头插入注射器的孔时，打开微量注射器阀，将氰基布络芬注

射进去后，迅速关闭阀门，抽出针头，等待仪器的分析结果。

6.色谱柱的清洗

分析工作结束后，要清洗进样阀中的残留样品，也要用适当的液体来清洗色

谱柱。

7.关

实验完毕后，关闭仪器和电脑。

五、实验数据与处理

Am

wf100%is

iAm1f1

si

A

i未知物峰面积；

A

s标准物峰面积；

AmVsec

130.04132.03137.023133.03

i

AmV

1404.331441.921452.4031432.88sec

i

mwm即

ii

A

mmi

iAs

s

A

m100ippm

iA

s

133.03

100ppm

1432.88

92.82ppm