实验一玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌.doc

实验一 玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌 一、实验目的要求 进一步加强学习、掌握玻璃器具等器材的清洗、烘干、包扎的包扎技术。 为下一次的课做好器材的准备工作。 二、原理 为确保实验顺利地进行，要求把实验所用的玻璃器皿清洗干净。为保持灭菌后和无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不安操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致试验的失败。 灭菌原理高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具。一般培养基在121．3灭菌20分钟即可。干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160—170），时间长（1—2小时）。但干热灭菌温度不能超过180，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧，因而一般塑料制品不能用干热灭菌。（ 将器皿放入２％盐酸溶液中浸泡数小时，以除去游离的碱性物质，最后用流水冲净。 对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上晾干，即可使用。 常用旧玻璃器皿的洗涤 确实无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用前后，可按常规用洗衣粉水进行刷洗； 吸取过化学试剂的吸管，先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。 带菌玻璃器皿的洗涤 凡实验室用过的菌种以及带有活菌的各种玻璃器皿，必须经过高温灭菌或消毒后才能进行刷洗： 带菌培养皿、试管、三角瓶等物品，做完实验后放入消毒桶内，用灭菌后刷洗。来苏后灭菌取出冲洗。来苏后 单独高压灭菌：用灭菌 灭菌:干热灭菌:160～165℃烘箱中灭菌2h；或湿热灭菌:121 ℃ 20～30min 干热灭菌法 将包扎好的玻璃器皿摆入电热烘箱中，相互间要留有一定的空隙，以便空气流通。 关紧箱门，打开排气孔，接上电源。 待箱内空气排出到一定程度时，关闭上排气孔，加热至灭菌温度后，固定温度进行灭菌：160℃—165℃保持2小时。2小时后切断电源。 待烘箱内温度自然降温冷却到60℃以下后，再开门取出玻璃器皿，避免由于温度突然下降而引起玻璃器皿碎裂。 高压蒸汽灭菌法 关好排水阀门，放入纯净水或蒸馏水至标度。注意水量一定要加足，否则容易造成事故。 将须要灭菌的器材、培养基等装入灭菌锅中，加盖密封。旋紧螺旋时，先将每个螺旋旋转到一定程度（不要太紧），然后再旋紧相对的两个螺旋，以达到平衡旋紧，否则易造成漏气，达不到彻底灭菌的目的。 通电加温，打开排气活门，排尽锅内的空气。通常当压力表指针升至5磅或0.05MPa时，打开排气活门放气，待压力表指针降至零点一小段时间后，再关闭活门。即活门冲出的全部是蒸汽时则表示彻底，此时可关闭排气活门，如果过早关闭活门，排气不彻底，也达不到彻底灭菌的目的。 恒温灭菌: 0.1MPa 或15磅压力保持20～30分钟。压力表的指针上升时，锅内温度也逐渐升高，当压力表指针升至0.1MPa时或15磅时，锅内温度相当于120℃～121℃（等于一个大气压），此时开始计算灭菌时间，控制热源，使处于0.1MPa 或15磅压力保持20～30分钟，即能达到完全灭菌的目的，然后停止加温。当达到所需温度时开始计时，并在此温度下保持所需的时间。 降温：自然降温或打开活门排汽降温。稍微打开一点排气活门，使锅内蒸汽缓慢排除，然后逐渐开大活门，气压徐徐下降，注意勿使排气过快，否则会使锅内的培养基沸腾而冲脱或沾染棉花塞，但排气太慢又使培养基在锅内，受高温处理时间过长，对培养基也是不利的。一般从排气到打开锅盖以10分钟左右为好。 当锅内蒸汽完全排尽时即压力表指针降到零时，要立即打开锅盖。 取出灭菌物品：当锅内温度下降到60℃左右时器材或培养基。如培养基需制备固体斜面培养基时，则应趁热将试管斜放在桌上，上面盖上报纸以免落灰尘，冷却后便可收起。 最后将高压灭菌器内的剩余水排出。 观察灭菌效果。把灭菌培养基放入25℃温箱中，培养48小时观察灭菌效果。 48小时后不见杂菌生出，便证明培养基已达到灭菌目的，可以使用。 五、思考题 1、干热灭菌和高压蒸汽法适用范围如何? 2、电热烘箱和高压锅如何操作? 各有哪些使用注意事项?