肺癌患者血清对淋巴细胞活化的影响.doc

肺癌患者血清对淋巴细胞活化的影响 胡云才 目的：越来越多的临床和实验研究表明，机体的免疫系统在抗肿瘤方面发挥着重要的作用。足够的免疫功能对于建立有效的抗肿瘤免疫反应是必要的，然而不可否认的事实却是，免疫功能并不低下的人仍然不能阻止恶性肿瘤的发生，说明恶性肿瘤具备某些逃避机体免疫系统攻击的能力，即免疫逃逸能力。恶性肿瘤产生并分泌可溶性因子，抑制免疫细胞的功能或诱导免疫细胞凋亡，从而构成了肿瘤免疫逃逸的重要组成部分。因此，恶性肿瘤患者血清中可能存在某些免疫抑制物质，具有免疫抑制作用。肺癌是严重危害人类健康和生命的恶性肿瘤，测定肺癌患者血清对淋巴细胞功能的影响，对于全面认识肺癌的免疫抑制在肺癌发生发展中的作用，寻求针对性的防治措施具有重要意义。本研究旨在通过对淋巴细胞活化抗原CD69和淋巴细胞增殖活性的测定，观察肺癌患者血清对淋巴细胞活化的影响。 方法：无菌条件下取肺癌患者外周静脉抗凝血10 mL，离心取上清，56 ℃下灭活30 min，再离心10 min，收集上清备用。再取离心抗凝外周静脉血的细胞沉淀中富含白细胞的部分，以3倍的Hanks液稀释细胞，Ficoll-UrografinμL RPMI1640培养液和40 μL肺癌患者血清，并以健康人血清作为对照。每孔加入预先制备好的淋巴细胞悬液4 μL（含1×106个淋巴细胞）、丝裂原植物血凝素（PHA，10 mg/mL）2 μL（终浓度为100 μg/mL），37 ℃、5% CO2、浓度为1×107/mlκ封闭30 min；将细胞分为2管，分别加入藻红蛋白标记的鼠抗人CD69单克隆抗体、藻红蛋白标记的IgG1κ同型对照，避光染色30 min后，采用流式细胞仪检测CD69的表达。μL RPMI1640培养液和40 μL肺癌患者血清，并以健康人血清作为对照。每孔加入制备好的淋巴细胞悬液2 μL（含5×105个淋巴细胞）、PHA（10 mg/mL）2 μL（终浓度为100 μg/mL），37 ℃、5% CO2、℃低温离心10 min后弃上清，每孔加入RPMI1640培养液180 μL和四甲基偶氮唑盐（MTT，5 mg/mL）20 μL，置于37 ℃、5% CO2、μL，采用酶标仪于490 nm处检测吸光度（A）值。结果：经PHA诱导后，肺癌组淋巴细胞表达CD69阳性率为（29.705±17.704）%，明显低于对照组（68.036±10.686）%；同时肺癌组淋巴细胞增殖，MTT法检测A值为0.693±0.140，明显低于对照组1.216±0.092，差异有统计学意义（均P＜0.01）。 结论：淋巴细胞CD69的表达和淋巴细胞的增殖活性可以很好地反映淋巴细胞的活化程度。本研究通过采用流式细胞术和MTT实验分别检测肺癌患者血清处理后淋巴细胞CD69的表达阳性率和淋巴细胞增殖活性，结果显示肺癌患者血清对淋巴细胞活化具有抑制作用，成为肺癌免疫逃逸的重要机制之一。因此有必要深入研究肺癌患者的免疫抑制作用，探索其免疫抑制机制，寻求有效方法阻断或削弱肿瘤细胞的免疫抑制作用，以达到有效的免疫治疗效果，为肿瘤的免疫诊断和免疫治疗寻求理想的方法。 Objectives: More and more clinical and experimental researches indicated that the immune system in the host plays an important role in anti-tumor effect. Sufficient immunity is essential to perform efficient anti-tumor immune responses; however, an undeniable fact that the malignancy cannot be avoided in individuals with competent immune function implies that the malignant tumors have the ability to evade the attack of the immune systems in the host, which is called immune escape. The secretion of soluble molecules by malignant tumor to inhibit the functions of the immune cells or induce apoptosis of the immune cells constitutes an important part in the tumor immune escape. Therefor