siRNA靶向沉默p22phox表达对内皮细胞衰老抑制作用研究.pdf

HEREDITAS (Beijing) 2008 9 , 30(9): 1175―1181 ISSN 0253-9772 研究报告 DOI: 10.3724/SP.J.1005.2008.01175 siRNA p22phox 1 2 3 1 李虹 , 白小涓 , 刘强 , 王宁夫 1. , 310006; 2. , 110001; 3. , 310009 : 设计特异性siRNA(Short interference RNA)诱导人脐静脉内皮细胞株ECV-304 细胞NAD(P)H 氧化酶活性 亚单位p22phox 基因沉默, 探讨p22phox 基因沉默在血管紧张素 (Ang )诱导的 ECV-304 衰老中的作用及机 理。应用体外转录合成3 种siRNA 转染体外培养的ECV-304, RT-PCR 鉴定对p22phox 基因沉默的效率和特异 性, 确立适宜的转染浓度和基因沉默的持续时间; ECV-304 分为空白对照组、Ang 组、siRNA 转染组、Ang +siRNA 转染组, 观察细胞衰老改变及活性氧水平, 分析各组细胞p22phox 的mRNA 及蛋白表达。结果表明: 3 种siRNA 中, 一种对p22phox mRNA 表达抑制率达到 83 ％, 在一定转染浓度范围内, siRNA 诱导的基因沉默效 率呈剂量依赖性, 抑制效率高峰期在24~36 h; 给予Ang 后, β-gal 染色阳性细胞数显著增加, 出现衰老的特征 性改变, 衰老细胞p22phox 的 mRNA 及蛋白表达增加, 伴有一氧化氮(NO) 生成减少, 活性氧生成增加, siRNA 诱导p22phox 基因沉默后降低了活性氧水平, 增加NO 生成, 改善了Ang 诱导的ECV-304 细胞的衰老改变。 siRNA 干扰技术可成功诱导NAD(P)H 氧化酶p22phox 基因沉默, 从而减缓Ang 诱导体外培养的ECV-304 衰 老进程, p22phox 是防治衰老有希望的分子靶点。 : 血管紧张素; p22phox; 内皮细胞; 衰老; siRNA The study on inhabiting endothelial cell aging by targeted silencing of p22phox 1 2 3 1 LI Hong , BAI Xiao-Juan , LIU Qiang , WANG Ning-Fu 1. Department of Cardiology, the Affiliated Hangzhou Hospital, Nanjing Medical University, Hangzhou 310006, China; 2. Clinical Circulatory Section of the First Affiliated Hospital in CMU, Shenyang, 110001, China; 3. The Second Affiliated Hospital, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310009, China Abstract: The aim of the study was to determine the importance and possible mechanism of NAD (P)H oxidase subunits P (superscript 22phox) involved in human umbilical endothelial cell lines ECV-304 a