家蝇触角cDNA文库的构建与质量分析.pdf

动 　物 　学 　研 　究 　2005 , Apr. 26 ( 2) : 203 - 208 CN 53 - 1040/ Q　ISSN 0254 - 5853 Zoological Research 家蝇触角 cDNA 文库的构建及质量分析 朱彬彬1 ,2 , 姜 　勇 , 牛长缨 , 张长禹 , 雷朝亮 ( 1. 华中农业大学 昆虫资源研究所 , 湖北 武汉　430070 ; 2. 宜昌市疾病预防控制中心 , 湖北 宜昌　443000) 　　摘要 : 采用 SMART (switching mechanism at 5′end of RNA transcript) 技术 , 构建了家蝇 ( Musca domestica ) 的cDNA 质粒文库。按 TRIzol Reagent 试剂盒的操作说明提取家蝇触角总 RNA , 以此为模板, 通过 PowerScriptTM 反转录酶反转录合成第一链 cDNA ; 再以第一链 cDNA 产物为模板 , 用LDPCR 合成 cDNA 双链。该 cDNA 产物 8 经分级分离、连接和电转化 , 即得到家蝇触角cDNA 原始文库 , 其滴度为 63 ×10 cfu/ mL 。对原始文库进行扩 增 , 取适量扩增文库稀释并涂平板 , 用 PCR 方法测得文库的重组率为 91 % , 插入 cDNA 的平均长度为 17 kb 。 随机挑取克隆提取质粒 , 5′端测定插入片段的核苷酸序列, 克隆得到一个具有 5′和3′非编码区的气味结合蛋白 OBP3 基因 ( MdomOB P3 , GenBank 登录号AY826189) 。测序分析表明 , 该基因具有气味结合蛋白的标志性结构 域 ; 由推导的氨基酸序列同源性分析表明, 该基因与已报道的双翅目昆虫气味结合蛋白 OBP 有较高的同源性。 　　关键词 : 家蝇 ; 触角 ; cDNA 文库 ; SMART ; 气味结合蛋白 中图分类号 Q969453 1 ; Q963 　文献标识码 A 　文章编号 0254 - 5853 (2005) 02 - 0203 - 06 : : : Construction of a cDNA Library of the Antenna of Housefly , Musca domestica ZHU Binbin 1 , 2 , J IAN G Yo ng , NIU Changying , ZHAN G Changyu , LEI Chaoliang (1 . Institute of Insect Resource , Huazhong Agricultural University