乙醇法提取金银花总黄酮工艺的研究.doc

乙醇法提取金银花总黄酮工艺的研究 　　摘 要：黄酮类化合物是金银花中含量较多的次生代谢产物，具有多种生物学功效，以乙醇为溶剂，对提取工艺进行研究，结果表明：乙醇含量为70%、固液比1∶19、65℃下浸提3小时为最佳提取条件，样品提取率为3.55%。结果证明采用乙醇提取金银花黄酮是比较有效的途径，且方法操作简单便于推广和普及。 　　关键词：乙醇；提取；金银花；总黄酮 　　黄酮类化合物是天然产物，主要存在于植物中，许多药材的有效成分均为黄酮。总黄酮可以改善人体的血液循环，降低人体胆固醇含量，降低心脑血管疾病的发生。它还是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的自由基，可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生，其药理作用以引起重视。随着社会进步和对健康的追求，研究总黄酮类物质取得了一定进步，通过进一步研究，可以发挥其更大的作用，创造更多的机遇，使其在诸多领域发挥重要作用。 　　本试验采用乙醇法来提取总黄酮类物质，并通过总黄酮类物质的定性鉴定（颜色反应），确定有机溶剂提取液含有黄酮类物质。再利用单因素通过了不同的提取温度、乙醇浓度、时间、液固比等条件对金银花总黄酮提取率的影响，并通过正交试验设计，对乙醇法提取金银花中黄酮类物质的工艺参数进行优化，为企业规模化生产金银花总黄酮提供理论依据，以达到更加充分、合理的利用金银花资源提高金银花附加值的目的。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料、试剂与设备 　　1.1.1 材料 市售金银花。 　　1.1.2 试剂 芦丁标准样品；90%乙醇、浓硫酸、盐酸、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸?X、锌粉、硼酸等均为分析纯。 　　1.1.3 仪器设备 TU-1810紫外分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司；RE-5299旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；AL204-IC电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 黄酮的提取工艺流程 金银花→烘干→粉碎筛选→配制溶液→恒温提取→离心分离→蒸发浓缩。 　　1.2.2 金银花总黄酮含量测定 （1）芦丁标准溶液的制备。准确称取11.2毫克芦丁标准品，用90%乙醇溶解，定容至50毫升容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.4毫升，摇匀；放置60分钟后加入4%氢氧化钠溶液4毫升，摇匀；最后用60%的乙醇定容，15分钟后与420纳米处测定吸光值。以芦丁浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。（2）制作金银花总黄酮浓度标准曲线。取10.0毫升芦丁标准溶液置于50毫升比色管中，加入亚硝酸钠溶液（5%）2毫升，摇匀，并静置7分钟，再加入硝酸铝溶液（5%）2毫升，摇匀，再静置7分钟，加入氢氧化钠溶液（10%）5毫升，以无水乙醇定容至刻度，混匀，静置20分钟。以空白试剂为零点，在420nm波长的范围内测定吸光度。准确吸取标准使用液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00毫升分别置于25毫升比色管中，按照上述步骤显色，以空白调零点，在420纳米处测定吸光度。 　　1.2.3 金银花总黄酮的定性鉴定 量取金银花黄酮提取液80毫升于蒸发仪内浓缩至8毫升，备用。（1）盐酸―锌粉反应。取2毫升样品置于试管中，加少量锌粉，摇匀后，滴加数滴盐酸，当溶液呈粉红色时证明提取液中含有黄酮类物质。（2）硼酸反应。取2毫升样品浓缩液放于试管内，加入少许5%硼酸溶液，摇晃，当溶液无反应时证明提取液中含有黄酮类物质。（3）氢氧化钠反应。取2毫升样品浓缩液放于试管内，加入少许氢氧化钠，摇晃，当溶液呈黄色时证明提取液中含有黄酮类物质。（4）浓硫酸反应。取2毫升样品浓缩液放于试管内，加入少许浓硫酸，摇晃，当溶液呈橙红色时证明提取液中含有黄酮类物质。 　　1.2.4 单因素试验 （1）固液比对金银花总黄酮提取率的影响。精确称取10克金银花于回流瓶中，分别按1∶15、1∶17、1∶19、1∶21、1∶23的固液比加入70%的乙醇中，于65℃回流3小时。相同条件提取两次，然后将两次滤液合并，蒸发浓缩至100毫升，测定并计算样品液中总黄酮含量。重复三次取平均值。（2）温度对金银花总黄酮提取率的影响。精确称取10克金银花于回流瓶中，以70%乙醇为提取剂，固液比为1∶19，分别在55、60、65、70、75℃回流3小时。常温放置冷却后过滤，滤渣于相同条件下重复提取1次，然后将两次滤液合并，蒸发浓缩至100毫升，测定并计算样品液中总黄酮含量。重复3次取平均值。（3）时间对金银花总黄酮提取率的影响。精确称取10克金银花于回流瓶中，以70%乙醇为提取剂，固液比为1∶19，在65℃分别回流1、2、3、4、5小时。相同条件提取两次，然后将两次滤液合并，蒸发浓缩至100毫升，测定并计算样品液中总黄酮含量。重复3次取平均值。（4）乙醇浓度对金银花总黄酮提取率的影响。精精