质粒DNA的提取和纯化实验报告.pdf

质粒DNA的提取和纯化实验报告--第1页

资料范本

本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载

质粒DNA的提取和纯化实验报

告

地点：__________________

时间：__________________

说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与

义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时

请详细阅读内容

质粒DNA的提取和纯化实验报告--第1页

质粒DNA的提取和纯化实验报告--第2页

实验一、质粒DNA的提取和纯化

一、实验目的：

1、学习并掌握碱裂解法小量制备质粒DNA的方法。

2、初步了解DNA纯化的原理。

二、实验原理

1、细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不

等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传

成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也

会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传

递到后代。

2、质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子，重要的条件是可获得大

量纯化的质粒DNA分子。目前已有许多方法可用于质粒DNA的提取，本实验采

用碱裂解法提取质粒DNA。

3、碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：

当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液

后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与

染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。

4、纯化质粒DNA的方法通常是利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性

质。例如，氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心、离子交换层析、凝胶过滤层析、聚

乙二醇分级沉淀等方法，但这些方法相对昂贵或费时。对于小量制备的质粒

DNA，经过苯酚、氯仿抽提，RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质

和RNA，所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化、DNA片段的分离和酶切、常规

亚克隆及探针标记等要求，故在分子生物学实验室中常用。

三、实验步骤

1、挑取单菌落接种到含Amp的LB液体培养基试管内（3.5ml/管）

2、将试管放入恒温震荡培养箱中，37℃，200r/min培养12-16h。

质粒DNA的提取和纯化实验报告--第2页

质粒DNA的提取和纯化实验报告--第3页

3、将菌落转入1.5ml离心管中（尽量倒满）1200r/min，离心30s（沉淀

菌体）

4、重复一次第三步的过程

5、弃掉上清液并扣干，加入预冷的Solution1100微升，剧烈震荡打散菌

体

6、加入新配置的Solution2200微升，温和颠倒试管6-7次混匀，室温放

置5min，使液体由浑浊变为透明粘稠

7、加入预冷的Solution3150微升，温和颠倒离心管2-3次，震荡7-8

次，之后在1200r/min离心7min

8、小心将含有质粒DNA的上清液转移到另一离心管中（400-500微升）

9、加等体积的氯仿