HPLC法测定清肺胶囊中芍药苷含量.doc

HPLC法测定清肺胶囊中芍药苷含量【摘 要】目的：建立HPLC法测定清肺胶囊的芍药苷含量。方法：采用乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）的流动相，测定本品中芍药苷的含量，对流动相比例进行了调整，比较了乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87）、（15∶85）、（16∶84）等不同比例流动相的分离效果。结果证明（14∶86）的流动相可使芍药苷的峰形对称，分离完全，效果最好。 【关键词】HPLC法；清肺胶囊；芍药苷；分析；含量 清肺胶囊主要由石膏、川贝母、金银花、麻黄、苦杏仁、白芍药和牡丹皮等味药组成的中药复方制剂，具有养阴润燥、清热化痰和止咳平喘的功能。主要用于咳嗽痰热壅肺证，症见咳嗽，气喘，甚则不能平卧，咳吐粘痰，胸膈烦满，或急性支气管炎，肺炎、哮喘见上述证候者。芍药苷是清肺胶囊味药的主要成分之一。但目前的药品标准中无芍药苷含量的测定方法。因此，本文通过采用HPLC法测定清肺胶囊中芍药苷的含量，并对测定的结果进行分析和比较，希望进一步控制产品质量，提高药品标准。 1.材料与方法 1.1仪器与制剂 高效液相色谱仪：Waters2695高效液相色谱仪，检测器：Waters2489紫外检测器；色谱工作站：Empower。清肺胶囊为从市面购得，某制药厂生产（国药准字批号：0013657、0013659、0013660）；芍药苷对照品（批号：2011-07-36—2010-03-05，中国药品生物制品检定研究院）；乙腈为色谱纯；乙醇为分析纯；水为纯化水。 1.2方法 1.2.1色谱条件 Waters色谱柱（SymmetryC18，3.9mm×150mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）；流速：1.0mL/min；检测波长：230nm；柱温：30℃；进样量：10μL；理论板数：按芍药苷峰计应不低于3000；芍药苷峰与其前后相邻峰的分离度均1.5。 1.2.2试验溶液的制备 （1）对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品0.01046g，置100mL容量瓶中，加稀乙醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密量取5mL，置25mL量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，制成每1mL中含20μg的溶液，即得。 （2）供试品溶液的制备 取清肺胶囊约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加稀乙醇50mL，密塞，称定质量，超声处理50min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。 （3）阴性对照溶液的制备 按清肺胶囊处方比例和工艺同法制成缺牡丹皮及白芍药的阴性样品，按上述供试品溶液的制备方法制成阴性溶液。 （4）样品测定干扰性试验 按上述色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10μL，注入色谱仪，测定。供试品色谱中，芍药苷峰与其他峰分离较好，阴性样品在芍药苷出峰处无干扰峰出现，结果表明本法可行。 1.2.3线性关系考察 精密称取芍药苷对照品0.02107g，置100mL容量瓶中，加稀乙醇溶解至刻度，摇匀，分别精密量取2、3.5、5、6、7.5、9mL，置50mL容量瓶中，加稀乙醇制备成不同浓度对照品溶液。精密吸取10μL，注入液相色谱仪，按上述条件分别测定芍药苷的吸收峰峰面积。 1.2.4精密度试验精密吸取 上述对照品溶液10μL，重复进样5次，测得峰面积并计算。 1.2.5重复性试验 取清肺胶囊（批号：0013657）样品，按0.5g精密称取样品6份，按1.2.2项制备供试品溶液，吸取10μL，注入液相色谱仪，测定并计算含量。 1.2.6稳定性试验 取1.2.5供试品溶液，每隔2h进样测定峰面积。 1.2.7加样回收率试验 取已知含量的清肺胶囊样品，取0.25g，精密称定共9份，分别精密加入浓度为7.3800、9.6150、11.0700mg/mL的芍药苷对照品溶液50mL（精密称取芍药苷对照品0.01476、0.01282g置100mL的容量瓶中，分别加稀乙醇使溶解，并稀释至刻度，再分别量取浓度为0.1476mg/mL的对照品10mL、15mL，浓度为0.1282mg/mL的对照品溶液15mL，分别置于200mL容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，备用），按1.2.2项下自“精密加入稀乙醇50mL”起制备得供试品溶液，用外标法测定，计算回收率。 1.2.8样品测定 按1.2.1、1.2.2方法测定3批样品含量。 2.结果 2.1对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液的色谱见图1～3。 图1芍药苷对照品HPLC图 图2样品溶液HPLC图 图3阴性样品溶液HPLC图 2.2芍药苷对照品的精密度试验结果见表1 表1芍药苷对照品的精密度试验结果 由表1可见，芍药苷对照品精密度良好 2.3供试品溶液稳定性试验结果见表2 表2 供试品溶液稳定性试验结果 由表2