酸枣仁汤组分配方抗焦虑作用的机制研究.docx

酸枣仁汤组分配方抗焦虑作用的机制研究 酸枣仁汤是治疗肝血不足、虚热和虚证“虚虚证者睡眠不足”的著名方剂，其水提物具有显著的焦虑效果。在SZRT水提物分离出组分的基础上,本文采用国际上通用的焦虑动物模型———高架十字迷宫模型(elevated plus-maze,EPM),进一步考察组分配方SZRT1、SZRT6对焦虑模型小鼠行为学及脑组织和血浆β-内啡肽(β-endorphin,β-EP)的影响。 1 实验材料 1.1 动物 昆明种小鼠,雄性,体重(28±3)g,中国医学科学院实验动物研究所提供,动物合格证号:SCXK11-00-0066。 1.3 试剂 1.4 小鼠epm迷思 行为学测试仪器:小鼠高架十字迷宫(EPM);SN-695B智能放免测量仪,上海核所日环光电仪器有限公司产。小鼠EPM迷宫由两个相对的开放臂(open arm,长×宽分别为30 cm×5 cm)和两个相对的封闭臂(close arm,长×宽×高分别为30 cm×5 cm×15 cm)组成,1个连接4只臂的中央平台(central platform,5 cm×5 cm),开放臂与封闭臂二者互相垂直成为“十”(plus)字形状。 2 实验方法 2.1 dzp单次用药处理 小鼠每笼9-10只,不限食水。光照节律12L∶12D(7:00-19:00),室温(21±2)℃,保持安静。随机分为4组,即空白对照组、DZP组、SZRT1组、SZRT6组,每组18-20只。其中SZRT1组、SZRT6组分别按相当于全方生药20 g/(kg·d)给予SZRT1、SZRT6灌胃,DZP组按2.0 mg/(kg·d)给以DZP混悬液灌胃,正常组给予等容积蒸馏水。连续给药10 d,中药于第10天末次灌胃后1.5 h,DZP组和对照组于末次灌胃后0.5 h做行为学测试。所有动物提前2 h进入实验室。 2.2 进入开放臂时间 行为学测试于8:00-15:30进行。小鼠置于EPM中央平台,使其头部正对其中一个开放臂,释放后即开始记录5 min内下述指标:(1)进入开放臂次数(open arm entry,OE);(2)进入开放臂时间(open arm time,OT),单位为s;(3)进入封闭臂次数(close arm entry,CE);(4)进入封闭臂时间(close arm time,CT),单位为s。由(1)-(4)分别计算出:(1)开放臂和封闭臂总的进入次数(OE+CE),表示小鼠的运动能力;(2)开放臂进入次数比(OE%),即OE/(OE+CE)×100%;(3)开放臂停留时间比(OT%),即OT/(OT+CT)×100%。 2.3 edta23l的制备 小鼠迷宫行为学测试结束后,立即断头处死,迅速在冰盘上剪开颅盖和脑膜,取出全脑,立即称重后加到1 m L生理盐水中煮沸5 min后迅速冷却,用0.5 m L 0.1 mol/L的盐酸制成匀浆,置4℃100 mins后再用0.5 m L 0.1 mol/L氢氧化钠中和,离心取上清液-20℃保存,待测β-EP。断头处死同时,接血。离心管中预先加入10%的EDTA23μL和抑肽酶25μL。立即4℃、3000 rpm离心15 min,取上清夜,-20℃保存待测β-EP。 2.4 -ep测试 2.5 处理数据 各组数据用(x±s)表示,多组间比较采用q检验。全部数据使用SPSS10.0方差分析(ONE WAY ANOVA)统计软件进行处理。 3 结果 3.1 两组配方各组分间oe%、ot%比较 结果见表2。从表2可以看出,与空白对照组比较,DZP组SZRT1、SZRT6组OE%、OT%均显著高于对照组(P0.01或P0.05)。组分配方各组间OE%、OT%差异均无统计学意义(P0.05)。与空白对照组比较,DZP组和SZRT1、SZRT6组开放臂和封闭臂总的进入次数(OE+CE),差异均无统计学意义(P0.05)。 3.2 小鼠脑-ep含量的测定 从表3可以看出,与空白对照组比较,DZP组小鼠全脑和血浆β-EP含量均无显著变化。与空白对照组比较,SZRT1组和SZRT6组的小鼠脑组织中β-EP含量明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。与空白对照组比较,实验各组小鼠血浆中的β-EP含量变化,差异无统计学意义(P0.05)。SZRT1组和SZRT6组小鼠脑组织和血浆β-EP含量,差异均无统计学意义(P0.05)。 4 模型小鼠血浆中-ep含量的检测结果 高架十字迷宫(EPM)是抗焦虑研究中应用最广泛的模型之一,开放臂进入次数比(OE%)和开放臂停留时间比(OT%)是该模型测试中的经典指标,反映的是动物趋近-规避冲突的结果,与焦虑程度直接相关。通常抗焦虑药只增加动物对开放臂的探索,使OE%和OT%上升。开放臂和封闭臂总的进入次数(OE