NYT 2066-2011 微生物肥料生产菌株的鉴别聚合酶链式反应（PCR）法.pdf

聚合酶链式反应PCR.ppt ⑵复性温度和时间：PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度的选择，可根据引物的长度和G+C含量确定，长度在15～25bp之间时，复性温度Tm=4(G+C)+2(A+T)计算得到，一般位于40～60℃，30～60s。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。一般情况下选择55℃30″，足以使引物与模板之间完全结合。第23页，讲稿共34页，2023年5月2日，星期三⑶延伸温度和时间：一般位于Taq酶最适作用温度70～75℃之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70～75℃。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，1K

2024-01-25 约4.57千字 34页立即下载

聚合酶链式反应PCR.ppt 六、PCR扩增产物的分析1、凝胶电泳分析法：聚丙烯酰胺凝胶电泳灵敏度远高于琼脂糖电泳，用于探讨PCR扩增的灵敏度效果好，但配制复杂，常用琼脂糖凝胶电泳。2、点杂交3、微孔板杂交法第31页,共34页，2024年2月25日，星期天七、PCR技术的主要用途1、目的基因的克隆：PCR技术为在重组DNA过程中获得目的基因片段提供了简便快速的方法。2、基因的体外突变：可以随意设计引物在体外对目的基因片段进行嵌和、缺失、点突变等改造。第32页,共34页，2024年2月25日，星期天3、DNA和RNA的微量分析：PCR技术高度敏感，对模板ＤＮＡ的含量要求很低，是DNA和ＲNA微量分析的最好方法。实际工作中，一

2024-04-08 约6.15千字 34页立即下载

PCR(聚合酶链式反应)原理.pdf PCR(聚合酶链式反应)原理 PCR是体外酶促合成特异DNA片段的方法，主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成：即在高温（95℃）下，待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；而后在低温（37～55℃）情况下，两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链；在Taq酶的最适温度（72℃）下，以引物3’端为合成的起点，以单核苷酸为原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成 DNA新链。这样，每一双链的DNA模板，经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行，每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模

2024-12-18 约6.36千字 4页立即下载

PCR(聚合酶链式反应)技术与应用.docx PCR〔聚合酶链式反响〕技术与应用一．PCR技术的原理 聚合酶链式反响〔PCR〕是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法，即通过试管中进展的DNA复制反响，是极少量的基因组DNA或RNA样品中的特定基因片段在短短几小时内扩增上百万倍。其反响原理与细胞内DNA复制相像，但PCR反响体系要简洁得多，主要包括DNA靶序列、与DNA靶序列单链3’末端互补的合成引物、4种dNTP、耐热DNA聚合酶及适合的缓冲体系。与细胞内的DNA复制相像，PCR也是一个重复地进展DNA模板解链、引物与模板DNA结合、DNA聚合酶催化形成的DNA链的过程，这些过程都是通过掌握反响体系的温度来实现的。PCR包括以下

2024-07-02 约9.55千字 8页立即下载

理论3：聚合酶链式反应(PCR)及引物设计课件.ppt 现象：正对照有条带，而样品则无对策: 1.纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量 2.更换Buffer或调整浓度 3.重新设计引物（避免链间二聚体和链内二级结构）或者换一管新引物 4.降低退火温度、延长延伸时间? 现象： 1）PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致； 2）或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。对策： 1.重新设计引物或者使用巢式PCR 2.适当降低模板或引物浓度 3.适当减少酶量 4.降低镁离子浓度 5.适当提高退火温度或使用二阶段温度法 6.减少循环次数? 对策： 1.纯化模板 2.更换Buffer 3.适当提高退火温

2016-11-01 约字 62页立即下载

聚合酶链式反应PCR实验报告.pdf 天行健，君子以自强不息。地势坤，君子以厚德载物。——《周易》实验二聚合酶链式反应（PCR） 一、实验原理 聚合酶链式反应（PCR）是利用DNA片段旁侧两个短的单链引物，在体外快速扩增特异DNA片段的技术。它应用热稳定的聚合酶，通过双链DNA模板的热变性、引物退火和引物延伸的重复循环，DNA片段以指数方式增加了百万倍。从非常微量的DNA甚至单个细胞所含有的DNA起始，可产生ug量的PCR产物。二、器材与试剂 1.器材：移液器，EP管，热盖PCR仪，电泳仪，量筒，锥形瓶，微波炉，电子天平，紫外照色仪 2.试剂：引物，模板，TaqDNA聚合酶，原料（dNTPs），缓冲液与Mg2+，H2O

2024-12-26 约5.54千字 6页立即下载

聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段讲解.ppt * * 实验三 聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段实验目的和要求学习和掌握PCR基因扩增的原理和操作方法，并深刻理解PCR基因扩增技术在DNA操作中的重要性。本实验以含有小鼠的基因（暂定T10）的质粒pCMV-Myc-T10为模板，扩增出约800bp的产物。 1) 多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR )：是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的方法。 1985年 Kary Mullis及同事创立。随后借助于热稳定性Taq DNA聚合酶的发现（1976年Chien等分离的热稳定性Taq DNA聚合酶），使PCR自动化成为可能；1987年

2016-11-03 约3.48千字 29页立即下载

实验七聚合酶链式反应PCR技术.pdf 实验七聚合酶链式反响〔 PCR〕技术精选ppt ¡1.实验目的 ¡2.实验原理 ¡3.实验仪器、材料与试剂 ¡4.实验步骤 ¡5.实验结果与讨论精选ppt 实验目的 ¡掌握PCR反响的原理及技术。精选ppt 实验原理 ¡聚合酶链式反响〔polymerasechainreaction〕简称PCR技术，是一种体外扩增特异 DNA片段的技术。 ¡利用PCR技术可在短时间内获得数百万个特异的DNA序列的拷贝。PCR 遗传病的基因诊断等方面得到广泛的应用。 ¡PCR技术实际上是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反响。 ¡PCR技术的特异性取决于引物和模板D

2024-10-12 约5.09千字 20页立即下载

聚合酶链式反应PCR实验实训报告 .docx 实验二 聚合酶链式反应（PCR） 实验原理 聚合酶链式反应（PCR）是利用DNA片段旁侧两个短的单链引物，在体外快速扩增特异DNA片段的技术。它应用热稳定的聚合酶，通过双链DNA模板的热变性、引物退火和引物延伸的重复循环，DNA片段以指数方式增加了百万倍。从非常微量的DNA甚至单个细胞所含有的DNA起始，可产生ug量的PCR产物。器材与试剂 1.器材：移液器，EP管，热盖PCR仪，电泳仪，量筒，锥形瓶，微波炉，电子天平，紫外照色仪 2.试剂：引物，模板，Taq DNA聚合酶，原料（dNTPs），缓冲液与Mg2+，H2O, 2*PCRmix溶液，DNA染料实验步骤 PCR反应体系的建立取

2021-01-27 约3.71千字 7页立即下载

第五章聚合酶链式反应(PCR技术)..ppt 特点遗传稳定性：SNPs是分布最广泛且稳定的点突变，SNPs具有更高的遗传稳定性，尤其是处于编码区的SNPs。检测易于实现自动化：SNPs通常是一种双等位基因的遗传变异，有利于发展自动化筛选或检测SNPs。单核苷酸多态性的类型与作用位于基因编码区同义变异（synonymous）错义变异（missense）无义变异（nonsense）提前终止（stop codon）单核苷酸多态性的类型与作用续位于非基因编码区或基因间隔区基因剪接（gene splicing）转录调控（transcript regulation）非编码RNA （non

2019-04-13 约1.76万字 163页立即下载

聚合酶链式反应(pcr)在医药方面的应用.pptx 聚合酶链式反应(pcr)在医药方面的应用汇报人：XXX2025-X-X 目录1.聚合酶链式反应（PCR）概述 2.PCR技术在病原体检测中的应用 3.PCR技术在遗传病诊断中的应用 4.PCR技术在法医学中的应用 5.PCR技术在药物研发中的应用 6.PCR技术在生物技术产业中的应用 7.PCR技术的未来发展趋势 01聚合酶链式反应（PCR）概述 PCR技术的基本原理PCR过程聚合酶链式反应（PCR）包括变性、退火和延伸三个步骤。变性阶段，双链DNA在95℃左右解链成单链；退火阶段，温度下降至50-65℃，引物与单链DNA互补配对；延伸阶段，温度升至72℃，DNA聚合酶合成新的DNA链。引物设

2025-04-14 约5.38千字 31页立即下载

聚合酶链式反应.ppt 目录目录第1页，共27页，星期日，2025年，2月5日一、PCR的定义在引物指导下由酶催化的对特定克隆或基因组DNA序列进行的体外扩增反应。第2页，共27页，星期日，2025年，2月5日PCR技术的创建Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到实现。1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技术1989年美国《Science》杂志列PCR为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。第3页，

2025-02-26 约2.12千字 27页立即下载

聚合酶链式反应.ppt ppt课件 聚合酶链式反应Polymerase Chain Reaction-PCR 检验科PCR室 * ppt课件 1984年，Kary.B.Mullis教授发明了具有划时代意义的PCR技术。1985年，实验室技术成熟并逐步在临床上应用。并因此项技术于1993年获得诺贝尔化学奖。二十世纪九十年代开始，在国内各级医院广泛开展。 2000年左右，全国开始规范化管理，工作人员需要培训资质，实验室需经过相关机构认证。 * ppt课件为什么要引入PCR? 1、病原体检测结果出具时间与临床诊疗相脱节。 2、特殊病原体检测，所需时间过长。 3、部分病原目前尚无体外培养检测方法。 4、方法学上，简便

2019-04-27 约2.08千字 31页立即下载

聚合酶链式反应-2011 分子生物学精品.ppt 实时PCR技术原理 Q R 3 3 5 5 上游引物下游引物荧光标记分子 R Q 3 3 5 5 荧光报告分子荧光淬灭分子荧光信号 SYBR Green I作用机理 Emission Emission SYBR Green I作用机理 Excitation Emission 原位PCR(In Situ PCR,IS-PCR)是利用完整的细胞作为一个微小的反应体系来扩增细胞内进行原位扩增目的片段,在不破坏细胞的前提下,利用一些特定的检测手段来检测细胞内的扩增产物进行定性定量定位分析。即把原位杂交的细胞定位技术与PCR的高灵敏度相结合的技术。三、原位 PCR ▲ 待检

2018-04-24 约9.91千字 108页立即下载

DB32T 1738-2011 草鱼出血病病毒(GCHV)逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法　　.docx ICS65.150 B52 备案号： DB32 江苏省地方标准DB32/T1738—2011 草鱼出血病病毒（GCHV）逆转录—聚合酶 链式反应(RT-PCR)检测方法 Testmethodofreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT-PCR) forGrassCarpHemorrhageVirus(GCHV) 2011-04-15发布2011-06-15实施江苏省质量技术监督局发布 I DB32/T1738—2011 前言本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准化的结构和编写规则》的规定编写。本标准的附录A为资料

2025-03-08 约4.25千字 8页立即下载