口腔癌相关成纤维细胞的染色体核型分析.pdf

口腔癌相关成纤维细胞的染色体核型分析1 1 2 2 2 2 郑晓辉 刘英 周红梅 陈谦明 李秉琦 1 四川大学华西口腔医学院颌面外科（610041） 2 四川大学华西口腔医学院口腔黏膜病学研究室（610041） 刘英现在川北医学院口腔科工作 E-mail :kxxsun@163.com 摘 要：本文通过对口腔癌相关成纤维细胞 （CAFs）和正常成纤维细胞 （NFs）进行对比分析， 初步了解 CAFs 的遗传学基本特征是否发生变化。用秋水仙素、低渗液处理细胞，经冰醋酸膨 胀及甲醇固定后，Giemsa 染色在油镜下观察，并采用 Visus2.1 软件对细胞染色体核型进行 分析。与 NFs 比较，CAFs 的染色体核型未见异常。CAFs 仍保留正常细胞的基本遗传特征， 未发生恶性转化。 关键词：成纤维细胞，癌，鳞状细胞，染色体，核型 1．引 言 肿瘤在发生发展的不同阶段均与其周围的宿主产生密切关系，从而形成肿瘤－宿主界面 微环境（microenvironment of the tumor-host interface），后者为肿瘤细胞提供了生存、 发展的“土壤” 【1】 。癌相关成纤维细胞（carcinoma-associated fibroblasts, CAFs）是上 述界面微环境中最主要的宿主细胞成分之一，其生物学特性的改变对肿瘤的浸润、转移将产 生重要影响 【2】。本课题组的前期研究工作已证实：口腔CAFs的形态、生长增殖特性、分泌功 能等均发生了明显变化 【3，4】。本实验拟通过对其染色体核型进行分析，初步了解口腔CAFs的 遗传学基本特征是否发生变化，为今后进一步探讨CAFs对口腔肿瘤--宿主微环境的作用提供 依据。 2．材料和方法 2.1 主要试剂 基础培养基 DMEM （Gibco），合成培养基 （DMEM中加入 10％小牛血清、谷氨酰胺 20mg/L、 青霉素 100u∕ml、链霉素 100µg∕ml、PH＝7.2），秋水仙素 (Sigma)。 2.2 实验细胞来源 将前期 实验中冻 存 的第三代 纯化舌CAFs及同部 位 的正常成 纤维细胞 （normal fibroblasts, NFs）进行复苏 【3】 ，用作本实验研究。 1本课题得到 1. 高等学校博士学科点专项科研基金（项目编号：20030610051）；2. 教育部回国人员启动基 金（200340606）资助 1 2.3 染色体核型分析 取对数生长的细胞，加入 50µl 秋水仙素，继续培养 4h；用吸管轻轻吹打分裂相细胞， 1000rpm 离心 10min，吸弃上清液；逐滴加入 0.5ml 预温 37℃的KCL （0.075mol∕L），混匀， 补加至 5ml，用吸管轻轻吹打均匀，37℃孵育 30min；新鲜固定液 （1:3 醋酸甲醇）固定；取 －10℃冰冻的载玻片，距离玻片 15cm 高度，向玻片滴 1～2 滴细胞悬液，于空气中干燥；Giemsa 染色 20min，流水冲洗玻片背面，晾干；二甲苯透明 3 次，中性树胶封片；油镜观察，用 Visus2.1 软件做分析处理。 3．结果 CAFs 染色体核型与 NFs 相比未见明显差异（图 1、2）。 图 1 CAFs 核型分析 图 2 NFs 核型分析 4.讨论 各种生物体细胞的染色体具有一定的数目、形状和结构，这些特征在正常细胞周期中都 保持着相当的稳定性，是细胞的基本标志，称为核型。在细胞的分化过程中，一些外源