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人过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)酶联免疫分析.doc

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人过氧化物酶体增殖因子活化受体γ( PPAR-γ)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 产品编号:CSB-E08623h 检测范围: pg/ml - 2000 pg/ml 最低检测限: pg/ml 特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的PPAR-γ,且与其他相关蛋白无交叉反应。 有效期:6个月 预期应用:ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中PPAR-γ含量。 说明 1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。 2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。 3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。 4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗PPAR-γ抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗PPAR-γ抗体、HRP标记的,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的PPAR-γ呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。 标准品(Standard):2瓶(冻干品)。 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液?(HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。 生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100) 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100) 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 需要而未提供的试剂和器材 标准规格酶标仪 高速离心机 电热恒温培养箱 干净的试管和Eppendof管 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器 6. 蒸馏水,容量瓶等 标本的采集及保存 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。 2 - 8°C 1000 g离心15分钟,或-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。 注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。 标本的稀释原则: 首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。 标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为00 pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释 pg/ml, pg/ml,500 pg/ml,250 pg/ml,125 pg/ml,62.5 pg/ml,31.2 pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml,临用前15分钟内配制。 如配制0 pg/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)0 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。 生物素标记抗体的稀释原则: 临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。 辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则: 临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液?的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。 操作步骤 实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加
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