实验5 苔黑酚法测定酵母中RNA含量.ppt

实验五 苔黑酚法测定酵母中RNA的含量;一、目的 掌握用苔黑酚法测定RNA含量的原理和方法。;二、实验原理 核糖核酸与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变为糠醛，后者与3，5-二羟基甲苯（苔黑酚）反应呈鲜绿色，该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂，反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20～250μ?g范围内，光吸收与RNA的浓度成正比。苔黑酚反应特异性较差，凡戊糖均有此反应，DNA和其他杂质也能给出类似的颜色。因此测定RNA时可先测定DNA含量，再计算出RNA含量?。 ;三、实验器材 粗制RNA； 试管； 吸管； 分光光度计； 水浴锅。;四、实验试剂 标准RNA母液：准确称取RNA10.0mg ，用少量蒸馏水溶解（如不溶，可滴加浓氨水，调pH7.0），定溶至10.0ml，此溶液每ml含RNA1mg。 标准RNA溶液：称取母液1.0ml，置于10ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。此溶液为100ug RNA/ml。 样品溶液：??一定量的RNA粗品用蒸馏水溶解并定溶，RNA 浓度在10~100ug/ml范围内。 苔黑酚试剂。;;样品的测定 取1.0ml样液置试管内，加蒸馏水1.0ml 及苔黑酚试剂2.0ml，沸水浴中保温45min，冷却，测定其A670nm。根据标准曲线求RNA的质量（ug）。