不同种源黄木阿月浑子遗传多样性分析.doc

摘要 黄连木（Pistacia chinesis Bunge.）和阿月浑子（Pistacia vera L）是黄连木属重 要的生物质能源和经济树种。本文采用形态学观察和DNA分子标记技术对不同种源 的黄连木群体和引进的阿月浑子品种进行了遗传多样性和亲缘关系分析，以期为黄连 木优良种质和阿月浑子优良品种的筛选提供科学依据，主要研究结果如下： 1.采用形态学观察和生理测定的方法，对不同种源黄连木种子的横纵径比、千 粒重等形态学指标和发芽率、发芽势等生理指标进行了分析比较，结果表明，不同 种源黄连木种子的横纵径比、千粒重、发芽率、发芽势等指标均存在显著或极显著 差异。种子千粒重为37.56~56.20 g，横纵径比为0.55~0.75；发芽率为 15.25%~54.38%，发芽势在20.55%~54.38%之间。武安种子的千粒重为56.20 g， 明显大于其它种源的种子，最小的为安徽种子。林州种源发芽率（54.38%）最高。其 次是四川、房山、武安和房山，最低的是绛县。 2.利用UPGMA聚类分析，依据黄连木种子表型性状进行了分类研究。参试 6个种源可分为两个组群：第一组群包括安徽滁州、四川康定、北京房山3个群体， 其中四川康定与北京房山群体种子表型特征基本相同；第二组群包括山西绛县、河南 林州、河北武安3个群体，其中山西绛县与河南林州群体种子表型特征较为相近。 3.DNA提取方法：用预处液（3%可溶性PVP，2%β-巯基乙醇，100mmol/L -1 EDTA） 和CTAB提取缓冲液（2%β-巯基乙醇、水溶性PVP和4%CTAB）提取阿月浑子和黄 连木基因组DNA，其OD260/OD280值在1.78~1.9之间，可用于PCR扩增。 4.利用正交试验设计L16(4 4 )，对模板DNA、Taq DNA聚合酶、引物浓度、dNTP 浓度进行了筛选研究，建立了适宜黄连木的RAMP反应体系。20μL PCR反应体系为： 1×buffer﹢0.8μL dNTP(250μmolL -1 )﹢0.8μL引物﹢0.8μL Taq酶。 5.不同种源黄连木的RAMP分析：13对引物组合所产生的115条DNA扩增片 段中，有109条具有多态性，多态位点百分率(PPB)为94.78%；Shannon多样性指数 I=0.5541，Neis多样性指数H=0.38030，物种总基因多样性(Ht)为0.2963；种群内基 因多样性(Hs)为0.3803，群体间基因分化系数(Gst)为0.2209，表明22.09%的变异存 在于种群间，群体内的变异占了总变异的77.91%；基因流(Nm)为1.7633，显示种群 间的基因交流顺畅。UPGMA聚类分析表明，以遗传距离0.16为阈值，可以分为两类： 武安、林州、房山、滁州、绛县居群聚为一类；康定居群独自聚为一类。 5.不同阿月浑子品种亲缘关系分析：用筛选的21个随机引物对13个品种阿月 浑子DNA进行PCR扩增，共扩增出137个位点，其中多态位点122个，多态位点比 率占89.05%，平均每个引物扩增多态性DNA的带数为5.81条。品种间遗传距离在 0.2015~0.5163之间，表明各品种间具有一定的遗传差异。UPGMA聚类分析表明， 13个阿月浑子品种在遗传距离0.40处可划分为3个类群，基本反映了阿月浑子品种 间的遗传多样性。 关键词：黄连木；阿月浑子；遗传多样性；RAMPGenetic diversity of different geographical populations of Pistacia chinesis Bunge and Pistacia vera L. Author:Wang Chao Major:Forest Genetic Breeding Supervisor:Prof.Lu Bingshe Abstract Pistacia chinesis Bunge.and pistachio（Pistacia vera L）are important energy and economic trees,this article from the seed morphological markers and DNA markers analysis of genetic diversity of Pistacia chinesis Bunge.and Pistacia vera L.genetic relationship between sub-species,and has achieved initial results. In this paper,the length to width ratio,1000 seeds’mass,germinating rate, germinat