从柏科植物中分离具有抗肿瘤抗真菌抗菌活性的内生真菌.doc

从柏科植物中分离具有抗肿瘤、抗真菌、抗菌活性的内生真菌 摘要 最近的研究可以看出柏科植物体内分离的内生真菌的生物勘探情况。本篇文章主要探讨健康寄主植物如柏木属、杉属、侧柏属体内高活性的内生真菌菌种。本文中，内生链格孢菌、链格孢菌、链格孢属是从健康的桧柏球体内分离出的。内生真菌生物活性和生物多样性的恢复是一个生物地理学和主机标识。我们同样研究了链格孢菌的代谢产物，突出了他们的抗增殖、抑制生长的能力以及对稻瘟梨火疫病菌和丁香假单胞菌致病性和致敏真菌柏科植物家族内生链格孢属链格孢属的真菌（座囊菌纲、子囊菌门）广泛分布在植物，土壤，食品，环境和室内空气特别是在免疫功能低下的一些链格孢属菌已成为人体的病原体哮喘，暗色丝孢霉病，灰指甲，鼻窦炎，溃疡皮肤感染，角膜炎，内脏感染骨髓炎法尔斯（南伊朗），桂兰（伊朗北部），哈马丹（伊朗西部），和 中央（伊朗中心）刺柏棕竹植物标本（树枝的叶子，干皮，水果）收集HS-1390和目标植物病原芽孢杆菌来检测链格孢菌代谢产物提取A. Ghasemi植物研究所提供。在体外首先利用稻瘟病菌对内生真菌菌株活性进行初步测试，然后再利用其它的松柏植物病原病菌。色二孢属真菌Spencermartinsia viticola等来自库尔德斯坦大学，伊朗链格孢菌的代谢产物提取(4.9x104 mL-1;0.02%酵母提取物/50mL)接种在96孔板上。样品提取液（50ml）通过连续稀释到最终浓度为250, 125, 62.5, 31.25, 15.62, and 7.81 lg mL-1.，添加到每个孔内。检测板在24℃条件下培养16h，将每个样品的提取液，起源于75分生孢子抑菌（MIC）和杀菌（MBC）的测定刺柏棕竹法尔斯（南伊朗），哈马丹（伊朗西部）Cupressus arizonica, Cupressus sempervirens var. cereiformis结果发现，链格孢菌的胞外产物对稻瘟病菌孢子萌发有明显的抑制作用（表2）CSE177 和CSE165(均是从C. sempervirens var. cereiformis)中分离)，在62.5 lg mL-1浓度时均展现了抗增殖活性和在7.8 lg mL-1浓度时展现了抑制芽管伸长的作用。菌株POE103和POE182也表现出了在这两方面很强的活性。 同时，如表三所示，链格孢菌的细胞内代谢产物对稻瘟病菌的分生孢子起明显的抑制作用。令人惊讶的是，链格孢菌CAE92细胞内外代谢产物（其中胞外产物显示在所有最小的抗增殖活性）125 lg mL-1，在31.2 lg mL-1芽管伸长的强抑制作用。 链格孢菌的抗真菌活性 我们通过采用平板对峙的方法，利用稻瘟病菌分生孢子的数据来进行评估内生真菌对模式稻瘟病菌、柏树植物病原菌D. seriata, Phaeobotryoncupressi和Spencermartinsia viticola的抗真菌活性。事实上，所有的内生真菌分离株在体外菌会有65%-92%的抗菌活性，尤其是对稻瘟病菌（表4）。总的来说，链格孢菌CAE92 和A. pellucida POE182是对所有目标菌最有效的菌株。此外，链格孢菌 CSE177 和链格孢菌CSE165 对所有目标菌也有比较明显的效果。.用培养皿法，A. tangelonis POE103胞外产物的抗真菌活性最高。 表4 柏树内生链格孢菌对柏树病原真菌和模式稻瘟病菌的抗菌活性 观测数据为3组数据（显著水平P0.05）平均值。相同字母表示差异不显著。、 表5 内生链格孢菌细胞内外代谢产物的抗菌活性 观测数据为3组数据（显著水平P0.05）平均值。 a 最小抑菌浓度 b 最小杀菌浓度 链格孢菌细胞内外代谢产物抑菌和杀菌活性 根据表2表3和表4的数据，植物内生的 链格孢菌 CAE92, A. tangelonis POE103, 和A.pellucida POE182细胞内外代谢产物的分离用来进一步研究其对模式芽孢杆菌、离火疫病菌以及丁香假单胞菌的抗菌能力。如图所示，所有内生菌的代谢产物对三株革兰氏阴性菌和阳性菌均有抑菌和杀菌的活性（表5）。 胞外代谢产物的抑菌范围在7.8–31.2 lg mL-1，杀菌范围同样在7.8–31.2 lg mL-1。细胞内代谢产物的抑菌范围在15.6–62.5 lg mL-1，杀菌范围在31.2–125 lg mL-1。此外，链格孢菌CAE92和A. tangelonis POE103对革兰氏阴性菌更有效，然而A. pellucidaPOE182对革兰氏阳性菌更有效。 讨论 很明显所有的高等植物均会寄宿有一个或多个未被开发出来的内生菌。这些微生物主要寄居在植物组织的表皮层之下，而不会引起任何症状。内生微生物产生的次级代谢产物具有独特的杀虫、杀线虫