实验五-植物种子生命力的快速测定(精).ppt

种子发芽率的快速测定 Ⅰ. TTC法 Ⅱ. BTB法 Ⅰ. TTC法 （氯化三苯基四氮唑法） 一、原理 TTC（2，3，5－三苯基氯化四氮唑）的氧化态是无色的，可被还原成不溶性的红色TTF。凡有生命活力的种子胚部,在呼吸作用过程中都有氧化还原反应,而无生命活力的种胚则无此反应。应用TTC的水溶液浸泡种子，使之渗入种胚的细胞内，如果种胚具有生命力，其中的脱氢酶就可以将TTC作为氢受体使之还原成为TTF而呈红色，如果种胚死亡便不能染色，种胚生命力衰退或部分丧失生活力则染色较浅或局部被染色，因此，可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生命力。 二、材料、仪器设备及试剂 材料：小麦种子 仪器设备：小培养皿、刀片、 镊子、 温箱 试剂：0.5％TTC溶液（TTC应避光保存，且不宜久存）。 三、实验步骤 1. 将种子用温水（约30℃）浸泡6～8h，使种子充分吸胀。 2. 随机取种子50粒，然后沿种胚中央准确切开，用其一半，放于小烧杯/培养皿中。 3.在小烧杯/培养皿中倒入10mlTTC试剂，以淹没种子为度，于恒温箱30℃中保温60min。 ?4. 倒出TTC溶液，再用清水将种子冲洗1～2次，立即观察种胚被染色的情况，凡种胚全部或大部分被染成红色的即为具有生命力的种子。种胚不被染色的为死种子. 5.另取种子在沸水中煮5min杀死胚，做同样染色处理，作为对照观察. Ⅱ. BTB法 原理 ????凡细胞必有呼吸作用，吸收空气中的O2，放出CO2。CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3解离成H+和HCO3-，使得种胚周围环境的酸度增加，可用溴麝香草酚蓝法（BTB法）来测定酸度的改变。BTB的变色范围为pH6.0-7.6，酸性呈黄色，碱性成蓝色，中间经过绿色（变色点位pH7.1）。色泽差异显著，易于观察。 ? 二、材料、设备及试剂 材料：小麦种子 ?设备：培养皿、 刀片、 镊子 试剂：0.1％BTB琼脂凝胶 ? 三、实验步骤 1.浸种：同TTC法。 2.显色：取吸胀的种子30粒，整齐地埋于准备好的琼脂凝胶培养皿中，种子平放，间隔距离至少1cm。然后将培养皿置于30℃下培养90min，在蓝色背景下观察，如种胚附近呈现较深黄色晕圈的是活种子，否则是死种子。 3.计数：种胚附近出现黄色晕圈的活种子数，算出活种子百 分率。 注意事项 以上所介绍的方法只能快速地了解种子具有的发芽潜力，为急需之用。 TTC法染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色 如果种胚中非关键性部位（如子叶的一部分）被染色，而胚根或胚芽的尖端不染色都属于不能正常发芽的种子 * *