DB22T 3111-2020 猫杯状病毒检测 实时荧光RT-PCR法　　.pdf

ICS11.220

B41

DB22

吉林省地方标准

DB22/T3111—2020

猫杯状病毒检测实时荧光RT-PCR法

DetectionmethodofrealtimequantitativeRT-PCRforFelinecalicivirus

2020-03-16发布2020-03-30实施

吉林省市场监督管理厅发布

DB22/T3111—2020

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。

本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。

本标准起草单位：吉林农业大学、吉林省畜牧兽医科学研究院。

本标准主要起草人：胡桂学、王开、郭衍冰、姜雪、黄海龙、呼延含蓉、赵艳丽、程荣华、伊淑帅、

牛江婷。

I

DB22/T3111—2020

猫杯状病毒检测实时荧光RT-PCR法

1范围

本标准规定了猫杯状病毒实时荧光RT-PCR检测方法的试剂和材料、仪器设备、样品、试验步骤、结

果判定和废弃物处理的技术要求。

本标准适用于猫杯状病毒核酸的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

Ct循环阈值（Cyclethreshold）

Cdna互补脱氧核糖核酸（ComplementaryDeoxyribonucleicacid）

DMEM改良Eagle培养基（DulbeccosmodificationofEaglesmedium）

ORF开放阅读框（OpenReadingFrame）

RNA核糖核酸（Ribonucleicacid）

RT-PCR反转录聚合酶链式反应（Reversetranscriptionpolymerasechainreaction）

4原理

根据猫杯状病毒衣壳蛋白ORF2的保守区基因序列，设计引物和探针。探针在5’端标记FAM荧光素作

为报告荧光基团，3’端标记Eclipse作为淬灭荧光基团。反应进入退火阶段时，引物和探针同时与目的

基因片段结合，此时探针上荧光基团发出的荧光信号被淬灭基团所吸收，仪器检测不到荧光信号；反应

进入延伸阶段时，Taq酶发挥5’→3’的外切核酸酶功能，将探针降解。探针上的荧光基团游离出来，

所发出的荧光不再为淬灭基团所吸收而被检测仪所接收。随着PCR反应的循环往复，PCR产物呈指数形式

增长，荧光信号也相应增长。每个模板的Ct值与该模板起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越

多，Ct值越小。

5试剂和材料

5.1试剂

1

DB22/T3111—2020

除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯。实验用水应符合GB/T6682中一级水的要求。

5.1.1DMEM培养液。

5.1.2液氮。

5.1