拮抗菌Paenibacillus+polymyxa+CpS316菌株的分离鉴定与活性物质的提取纯化及性质研究.pdf

摘要 从泰山林地土壤中分离获得一株多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus maydis)、茶云纹叶枯病菌 polymyxa)，该菌株对板栗干腐病菌(Diplodia (Colletorot richam 棉花立枯病菌(Rhizoctomia zeicola sola)玉米圆斑病菌(Bipolaris Casici Leon)、黄瓜枯萎病菌 shoemaker)、辣椒疫病菌(Phyto phthora (Fusariumvasin feetum)、家蚕白僵菌(Beauveriabassiana)、苏云金芽孢 杆菌(Bacillus albicans)‘ var．kurstaki)、白假丝酵母(Candida thuringiensis 和大肠杆菌(E．colik12)等都有强烈拮抗作用。通过对该菌株进行形态观 察、生理生化实验、G+Cm01％颡]定和16SrRNA碱基序列测定。鉴定该菌 株为类芽孢杆菌属中的一株新的多粘类芽孢杆菌，定名为Paenibacillus polymyxa Bank注册，注册号为AY292989(2003年6月4日)。 ，对该菌株发酵条件的研究表明：该菌株用马铃薯葡萄糖液体培养基发 酵培养， 28C，200rpm摇瓶中振荡培养72h可获得高活性的发酵产物， 用苏云金芽孢杆菌HD-1做指示菌，将发酵液稀释40倍生测仍可形成明显 的抑菌圈。以8000rpm对发酵液离心收集菌体。用蒸馏水对菌体稀释：加 入适量吸附树脂在150rpm、28℃下振荡吸附4h，80％的丙酮解吸，过滤 解吸液得到活性物质的澄清溶液，旋转蒸发仪旋转蒸发去处丙酮，经 SephadexG一75分子筛层析得单一活性峰，收集峰值部分样品液经冷冻干 燥得到淡褐色粉末，该活性物质用丙酮充分洗涤、甲醇一乙醚重结晶获得 略带微黄的白色粉末，该括性物质50“g／ml仍可对苏云金芽孢杆菌HD一1 产生明显的抑制作用。 9C自11热25min活性基本不丧失； 该菌株产生的活性物质耐高温，121 对丙酮、乙醚、氯仿等有机溶剂不敏感。在酸性条件下j活性基本不变， 但在强碱条件下没有活性(调回PH僮可恢复活性)。矿 ．／＼_一， 分离鉴定 关键词l Panenil瞳cillus阳匀琊高Cp-$316 活性钧质 提取纯化 Isolation and Identificationofpaneibacillus polymyxa 16 strainandExtration and Purificationof Cp-S3 active substanceSecreted byPaenibacillus 16 polymyxa