课件：猪群常见疾病实验室诊断技术.ppt

物理灭菌法（紫外线、湿热、干烤等） 化学灭菌法（各种化学消毒剂） 消毒方法分为二类： （1）紫外线消毒：用于空气，操作台表面和不能使用其它法进行消毒和培养器皿。紫外线灯应距地面不超过2.5 米。 （2）温热消毒： 高压蒸气消毒：121℃，15 磅，20 －30分钟； 干热灭菌消毒：170℃， 2小时。 （3）化学消毒法：最常见的是70%酒精及1‰的新洁而灭，前者主要用于操作者的皮肤，操作台表面及无菌室内的壁面处理。后者则主要用器械的浸泡及皮肤和操作室壁面的擦试消毒。化学消毒法操作简单、方便有效。 每组负责人 （1）吴欣伟、刘志刚 （2）于俊勇、王文华 （3）张得玉 （4）何冉雅 （5）孔维立、于淼 总负责：秦宏阳 实验安排 病料的采集、运输与保存（讲课） 细菌的分离（实验） 病料处理（实验） 大肠杆菌：LB 猪副嗜血杆菌：TSA 每人4个： 一个分菌（LB、TSA） 一个药敏（LB、TSA） 一、细菌的分离（实验） 研磨（石英砂＋生理盐水或营养液） 反复冻融3次 二、病料处理（实验） 谢谢！ THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 PEDV和TGEV 小肠、小肠上皮（哺乳仔猪小肠切片的直接免疫荧光、免疫组化） 粪便 RT- PCR ELISA 口蹄疫 水疱液 水疱皮 猪流感 口、咽拭子 肺脏 气管分泌物 猪脑心肌炎 心脏 扁桃体 细菌性疾病 普通琼脂 血液琼脂 LB固体培养基 TSA TSB…… 重点是选择合适的培养基 猪副嗜血杆菌 肺 浆膜表面物质 渗出性脑脊髓液 心脏血液 心包积液 关节液 需要NAD和V因子 （1）TSA固体培养基： 准确称取胰蛋白大豆琼脂（Tryptone Soya Agar，TSA）40克，加入940ml蒸馏水，充分摇匀后加热至充分溶解，120℃高压蒸汽灭菌15min，加入50mL过滤除菌的牛血清、10mL过滤除菌的0.001%NAD，充分摇匀后倒平皿。 （2）TSB液体培养基： 准确称取胰蛋白大豆肉汤（Tryptone Soya Borth，TSB）30克溶于940mL蒸馏水，充分摇匀后120℃高压蒸汽灭菌15 min，加入50mL过滤除菌的牛血清、10mL过滤除菌的0.001%NAD即成。 胸膜肺炎放线杆菌 G— 损伤的肺组织 革兰氏染色 绵阳血琼脂分离 巧克力血琼脂 特殊的生化特性： CAMP检测 尿素酶 链 球 菌 肺、关节液、脑等 血液琼脂 大肠杆菌 肠道内容物 粪便 萎缩性鼻炎 肺 鼻分泌物 血液琼脂 1％葡萄糖麦康凯琼脂 肺炎支原体 非常难分离 生长时间4周 核酸检测 抗体检测 三、实验室设计 原则：要求工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘、实验室尽量分区。 （1）核酸检测区：核酸抽提、PCR扩增区域、电泳区。 超净工作台、水浴锅、普通冰箱、离心机、PCR仪、电泳仪、电泳槽、微波炉、定时钟等等。 最好分为3个房间。 （2）血清学检测区，如ELISA、乳胶凝集、HI等 酶标仪（ELISA）等 （3）细菌分离培养区 超净工作台、普通温箱、冰箱、摇床、普通天平、显微镜等等。 （4）洗刷消毒区 烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器等。 器械： 主要用于解剖动物、取材、切割组织等。 常用器械有：解剖刀、解剖剪（直头和弯头）、镊子、持针器、止血钳子等，用毕擦净、凉干，以防生锈，消毒以煮沸、高压或用70％酒精浸泡为上。 1. 各种储液玻璃瓶、吸管等 2. 培养皿： 30mm、60mm、120mm 3. 塑料制品：Tip 头、离心管等 4.其它：三角烧瓶、烧杯、量筒、漏斗、注射器等 器皿 浆膜及浆膜腔 浆膜出血 纤维素性胸膜炎及粘连 积液 猪瘟、链球菌病 猪肺疫、气喘病 传染性胸膜肺炎、弓形体病 睾丸 1个或2个睾丸肿大、发炎、坏死或萎缩 乙型脑炎、布氏杆菌病 肌肉 臀肌、肩甲肌、咬肌等外有米粒大囊泡 肌肉组织出血、坏死，含气泡 腹斜肌、大腿肌、肋间肌等处见有与肌纤维平行的毛根状小体 猪囊尾蚴病 恶性水肿 住肉孢子虫病 血液 血液凝固不良 链球菌病、中毒性疾病 主要症状 可能涉及的疾病 仔猪下痢 红痢、黄痢、白痢、传染性胃肠炎、流行性腹泻、轮状病毒感染、猪痢疾、副伤寒、空肠弯曲菌病、腺病毒感染、鞭虫病、胃肠炎、球虫病 呼吸困难 气喘病、猪肺疫、流感、接触传染性胸膜肺炎、传染性萎缩性鼻炎 神经症状 猪水肿病、乙型脑炎、李氏杆菌病、伪狂犬病、仔猪先天性肌陈痉、神经型猪瘟、链球菌病、传染性脑脊髓炎，食物、药物或农药中毒 流产或死胎 猪细小病毒感染、乙型脑炎、猪瘟、布氏杆菌病、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征、弓形体病、引起妊娠母猪体温升高的疾病及非传染病因素（包括高温、营养、中毒、机械损伤、应激、遗传等） 器官 病理变化 可