胡萝卜素柱层析.ppt

胡萝卜素的柱层析分离? 西安医学院 生物化学与分子生物学教研室 学习层析法在生物化学中的应用。 掌握胡萝卜素柱层析法分离的实验原理 及操作步骤。 实验目的： 1. 胡萝卜素（维生素A原） 胡萝卜素存在于辣椒和胡萝卜等黄绿色植物 中，因其在动物体内可转变成维生素A，故称为 维生素A原。 各种胡萝卜素的化学结构不同，它们被氧化 铝吸附的强度以及有机溶剂中溶解度都不同。 实验原理： 2. 层析法 层析法两个相：固定相、流动相。 分类：吸附层析、分配层析、离子交换层 析、凝胶层析和亲和层析法等。 吸附层析可根据操作形式的不同分为柱层 析和薄板层析等。 操作步骤： 一、提取 1.制备色素提取液 研磨：5-6g干红椒剪碎、研磨，加4ml 95%的乙醇，继续研磨数下，加入石 油醚6ml迅速研磨数下，三层纱布过滤。 除乙醇：分液漏斗中将过滤好的色素提 取液与10ml蒸馏水混合，静置分层，弃下 层水相，重复洗2-3次，至“水相透明”。 除水：塑料试管中，加入小半匙无水硫酸钠，再加入 除完乙醇的色素提取液。 二、层析柱制作 三、层析 1.石油醚2ml 2.提取液1ml 3.丙酮石油醚冲洗 “不断流” 四、观察结果 色带位置、宽度、颜色 操作注意事项： 1.有机溶剂及Al2O3安全操作使用。 2.层析柱用完不能水洗，直接将Al2O3倒出在 报纸上。 3.固体垃圾（辣椒皮及残渣、塑料试管、滤 纸片等倒入垃圾桶，避免堵塞下水道。