TaqManMGB实时荧光PCR对转基因大豆定量检测的研究.pdf

第 47卷 　第 3 期 中山大学学报 (自然科学版 ) Vo l47　No3 　 2008年 　5月 ACTA 　SC IEN T IARUM 　NA TURAL IUM 　UN IV ER SITA TIS　SUN YA TSEN I M ay　2008 　 TaqMan MGB 实时荧光 PCR对转基因大豆定量检测的研究 黄东东 , 翁少萍 , 吕　玲 , 常 　迪 , 何建国 (中山大学生命科学学院 , 广东 广州 5 10275) ( TM ) 摘 　要 : 利用实时荧光定量 PCR 技术 , 根据转基因大豆 Roundup R eady 的外源基因 35S启动子序列设计 TM 引物和 TaqM an M GB 探针 , 对大豆粉中 Roundup R eady 大豆含量进行了定量检测 , 根据这个检测体系建立了 ( 2 ) 35S启动子 C t值与样品中转基因成分数量之间的标准曲线和线性回归方程 相关系数 r : 09942 。本研究设计 的方法还可以应用到多组分的食品、饲料等加工产品 , 检测转基因成分的含量 , 并可作为转基因食品常规 PCR 定性检测方法 。 关键词 : 转基因大豆 ; 实时定量 PCR; TaqM an M GB 探针 ; 基因; 生物技术 ; 食品技术 Q78　　 A 　　 (2008) 030 14003 中图分类号 : 文献标识码 : 文章编号 : 　　随着基因工程技术的迅速发展 , 全球转基因作 Mo lecu lar System s Inc. , B ranch - bu rg, NJ , U SA ) ; 物的种植面积成倍增长 , 取得显著的经济效益世人 CTAB 购自华美生物有限公司 ; 蛋白酶 K购 自M er 瞩目, 但转基因作物潜在的生态风险 , 可能带来的 ck 公司 。 环境问题 、伦理问题和国际贸易问题等 , 促使国际 12　方法 上许多国家如欧盟 、日本 、韩国等都制订了相应的 ( 1) 大豆基因组 DNA 提取 : 大豆基因组 DNA 法规对转基因食品实行标签制度 [ 1 - 3 ] 。 的提取采用 CTAB 法 [ 10 ] , 得到样品 DNA 。 实时荧光定量 PCR 技术是在 PCR 反应体系中 (2) 引物和探针设计 : 利用 Prim er Exp re ss生 加入特异性 TaqM an M GB 荧光标记探针 , 使 PCR 物软件 , 根据在 GenB ank 中转基因大豆 (Roundup 扩增与杂交反应同时进行 , 利用荧光信号积累实时 R eady) 的外源基 因 35 S 启动子基 因序列 ( Gen 监测整个 PCR 进程 , 最后通过标准曲线对未知模 B ank