油菜中转基因成分检测普通PCR和实时荧光PCR方法（征求意见稿）.doc

ICS FORMTEXT FORMTEXT FORMTEXT FORMTEXT SN 中华人民共和国 FORMTEXT 出入境检验检疫行业标准 FORMTEXT SN/T FORMTEXT 1197— FORMTEXT XXXX FORMTEXT FORMTEXT 油菜中转基因成分检测 普通PCR和实时荧光PCR方法 FORMTEXT Detection of Genetically Modified Ingredients in Rapeseeds Conventional and Real-time PCR Methods FORMTEXT FORMDROPDOWN FORMTEXT （本稿完成日期：2013年9月17日） FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX发布 FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX实施 FORMTEXT 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 SN/T XXXXX—XXXX PAGE \* MERGEFORMAT 7 前????言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准替代SN/T 1197-2003 《油菜籽中转基因成分定性PCR检测方法》。 本标准与SN/T 1197-2003相比，主要修改如下： ——修改了标准的中文名称和英文名称； ——增加了实时荧光PCR检测方法； ——增加了品系特异性检测方法。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准主要起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：潘良文、李 想、黄 新、吕 蓉、杨捷琳、刘月明、高 琴。 油菜中转基因成分检测 普通PCR和实时荧光PCR检测方法 范围 本标准规定了油菜及其加工产品中转基因成分筛选、基因特异性和品系特异性普通PCR和实时荧光PCR检测方法。 本标准适用于油菜及其加工产品中转基因成分筛选、基因特异性和品系特异性定性检测。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 GB/T 19495.2 转基因产品检测 实验室技术要求 GB/T 19495.3 转基因产品检测 核酸提取纯化方法 GB/T 19495.7 转基因产品检测抽样和制样方法 术语、定义和缩略语 下列术语、定义和缩略语适用于本标准。 术语和定义 转基因 transgene 将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能DNA序列，通过生物工程技术，使其在该物种中进行表达，以便使该物种获得新的品种特征。 实时荧光PCR real-time polymerase chain reaction 实时荧光聚合酶链式反应。是指在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，荧光信号的强弱直接反映模板数量。 内源基因 endogenous gene 在检测物种中拷贝数恒定的、不显示等位基因变化的基因。该基因可用于判定物种特异性。 外源基因 exogenous gene 利用生物工程技术转入的其他生物基因，使该生物品种表现新的生物学性状。 Ct值 cycle threshold 每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。 缩略语 BAR：phosphinothricin acetyltransferase gene，草丁(铵）膦乙酰转移酶基因。 BARNASE：ribonuclease gene from Bacillus amyloliquefaciens，来源于解淀粉芽孢杆菌的核糖核酸酶基因。 BARSTAR：specific inhibitor of the barnase gene from Bacillus amyloliquefaciens，来源于解淀粉芽孢杆菌的BARNASE基因的特异抑制基因。 bp：base pair，碱基对。 BXN：nitrilase enzyme gene from Klebsiella pneumoniae subsp. Ozaenae，来源于肺炎克雷伯杆菌臭鼻亚种的腈水解酶基因。 CP4-EPSPS：5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase gene，5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因。 Cru A：Cruciferin A gene，油菜种子储藏蛋白基因。 CTAB：cetyltrith