第1章分析化学绪论.ppt

实用高效液相色谱法的建立 L.R.Snyder, J.J.Kirkland, J.L.Glajch Practical HPLC method development 2nd 1997 (第一版 1988年出版) HPLC技术问世已有30余年,已步入发展与应用的成熟时期,关于方法建立的研究目前已开始逐步趋向稳定。 我们相信本书在未来十年或二十年中，理应不会过时并仍有参考价值。 实用高效液相色谱法的建立 1 绪论* 9 常规样品分离 2分离的基础* 10 计算机辅助方法 3检测灵敏度与选择性 11生化样品 4样品的制备 12手性分离 5色谱柱* 13制备分离 6中性样品* 14定量 7离子样品 * 15完善方法 8梯度洗脱* High-Performance Gradient Elution The Practical Application of the Linear-Solvent-strength Model LLOYD R. SNYDER JOHN W. DOLAN 第一章 绪论 1-1 开始前应知道 1-1-1样品的性质 所含化合物的数目 化合物的结构或官能团 化合物的分子量 化合物的pKa 化合物的uv光谱图 化合物的浓度范围 样品的溶解度 1-1-2分离的目的 主要目的是定量分析？共存物（杂质）的检出？未知样品组分的确认？制备性的分离？ 是否有必要解析出样品中的所有成分？ 定量分析的准确度和精密度需要多大？ 方法的普适性？ 实验室的状况如何？ 1-2 建立分离方法 1-2-1 选择HPLC分离模式与起始条件 假设为一般样品（分子量〈2000） 选择HPLC分离模式(图1--3) 1-2-2开始方法建立 1-2-3改善分离 1-2-4可重现的分离 1-2-5完善方法 主要HPLC方法的特性 反相HPLC 流动相：水-有机溶剂 (A%--B%) 色谱柱：C18、C8、苯基、三甲基硅烷、氰基 适合的样品 能溶于水-有机混合液的大多数样品，尤其是中性或非离子性化合物的首选。 主要HPLC方法的特性 离子对HPLC 流动相：水-有机溶剂，控制PH的缓冲溶液和离子对试剂 色谱柱：C18、C8、氰基 适合的样品 离子或可电离的化合物，尤其是碱或阳离子样品的良好选择。 主要HPLC方法的特性 正相HPLC 流动相：有机溶剂混合液 色谱柱：氰基、氨基、二醇基、硅胶 适合的样品 当反相或离子对HPLC无效是的第二个良好选择；不溶于水-有机混合液的亲脂样品的首选；异构体混合物。 1-2-2开始方法建立 首次HPLC分离较好的实验条件 色谱柱 C18、C8 5μm 15×0.46cm 流动相 水或缓冲溶液-乙氰(80-100%) 缓冲溶液 25mmol磷酸钾 2.0PH3.0 添加剂 胺改性剂、离子对试剂（开始不用） 流速 1.5—2.0ml/min 温度 35—45℃ 样品量 体积25μL 重量 100 μg 为了避免漏检样品中可能存在的化合物,建议用洗脱能力非常强的流动相,做第一次预实验,然后按照一定速度(20%)降低强溶剂的比例,如例（图1--4）所示. 当样品中存在对纯乙氰或纯甲醇强保留的组分时可以考虑用非水反相色谱NARP或者是正相色谱 HPLC方法建立的目标（表1--5） * Eij * 对中性样品不需要缓冲剂; 对PH2.5的条件应使用对PH稳定的色谱柱(详见第五