生物化学酶分析.ppt

* * * * → * * 抗体酶，比较抽象，一般把抗原打到动物体内都会产生抗原，现在设计一种物质，这种物质正好是一个反应的过渡态中间物，然后把这个过渡态中间物打到动物体内，那么你可以想象，动物必定要产生一种抗体，而这个抗体正好能和这个过渡态中间物结合，也就是结构应该和这个过渡态互补，然后我们收集这个抗体，这个抗体就是抗体酶，所谓抗体酶，说白了就是有催化活性的抗体。 抗体酶所催化的反应正是刚开始所说的那个形成过渡态中间物的反应，之所以能够催化这个反应，就是因为它能够和过渡态中间物结合（因为他就是以过渡态中间物为抗原产生的抗体），从而稳定过渡态中间物，进行催化作用。 * * * 特点： 抑制剂只与酶－底物复合物结合； 抑制程度取决与抑制剂的浓度及底物的浓度； 动力学特点：Vmax降低，表观Km降低。 抑制剂↑ 1/V 1/[S] 无抑制剂 ? 双重影响 温度升高，酶促反应速度升高；由于酶的本质是蛋白质，温度升高，可引起酶的变性，从而反应速度降低 。 二、温度对反应速度的影响 最适温度 (optimum temperature)： 酶促反应速度最快时的环境温度。 * 低温的应用 最适温度 三、 pH对反应速度的影响 最适pH (optimum pH)： 酶催化活性最大时的环境pH。 0 酶 活 性 pH pH对某些酶活性的影响 胃蛋白酶 淀粉酶 胆碱酯酶 2 4 6 8 10 四、激活剂对酶作用的影响 金属离子：K+、Na+、 Mg2+、Cu2+、Mn2+、Zn2+、Se3+ 、 Co2+、Fe2+ 阴离子： Cl-、Br- 有机分子 还原剂：抗坏血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽 金属螯合剂：EDTA 定义：凡是能提高酶活性的物质，称为酶的激活剂。 类别： 第八节 酶活性的调节 酶活性的调节（快速调节） 酶含量的调节（缓慢调节） 调节方式 调节对象 关键酶 二、酶的别构效应 注意：变构中心不是酶活性中心的组成部分。 具有别构部位的酶称为别构酶（变构酶） 动力学： 其[S]—V的动力学曲线呈“S”型。 有些酶分子除具有与底物结合的活性中心外，还具有与非底物的化合物结合的部位，这个部位叫做酶的别构中心。 与别构中心结合的物质称为调节剂或别构剂 激活剂：使酶反应速度增高的。 抑制剂：使酶反应速度降低的。 酶的别构（变构）效应示意图 效应剂 别构中心 活性中心 调节物与酶分子中的别构中心结合后，引起酶蛋白构象的变化，使酶活性中心对底物的结合和催化作用受到影响，从而调节酶促反应速度及代谢过程，此效应称为酶的“别构效应”。 别构激活（正协同效应）和别构抑制（负协同效应） 三、 酶的共价修饰调节 共价修饰(covalent modification) 在其他酶的催化作用下，某些酶蛋白肽链上的一些基团可与某种化学基团发生可逆的共价结合，从而改变酶的活性，此过程称为共价修饰。 常见类型 磷酸化与脱磷酸化（最常见） 乙酰化和脱乙酰化 甲基化和脱甲基化 腺苷化和脱腺苷化 －SH与－S－S互变 酶的磷酸化与脱磷酸化 -OH Thr Ser Tyr 酶蛋白 H2O Pi 磷蛋白磷酸酶 ATP ADP 蛋白激酶 Thr Ser Tyr -O-PO32- 酶蛋白 四、酶原激活(enzymogen activation) ⒈ 酶原(enzymogen) ：没有活性的酶的前体。 ⒉ 酶原激活：无活性的酶的前体在一定条件下转化为有活性的酶的过程。 ⒊ 实例： 胰蛋白酶原的激活 ⒋ 酶原激活的机理：主要是分子内肽键的一处或多处断裂，使分子构象发生一定程度的改变，从而形成或暴露酶的活性中心。 二、酶原激活(enzymogen activation) 酶原激活的机理 酶 原 分子构象发生改变 形成或暴露出酶的活性中心 一个或几个特定的肽键断裂，水解掉一个或几个短肽 在特定条件下 赖 缬 天 天 天 天 甘 异 赖 缬 天 天 天 天 缬 组 丝 S S S S 46 183 甘 异 缬 组 丝 S S S S 肠激酶 胰蛋白酶 活性中心 胰蛋白酶原的激活过程 5.酶原激活的生理意义 避免细胞产生的酶对细胞进行自身消化，并使酶在特定的部位和环境中发挥作用，保证体内代谢正常进行。 有的酶原可以视为酶的储存形式。在需要时，酶原适时地转变成有活性的酶，发挥其