GB/T 5521-1989谷物和谷物产品α-淀粉酶活性的测定　比色法.pdf

中华人民共和国国家标准 谷物和谷物产品a-淀粉 酶活性的测定 比色法 GB 5521一 89 代替 GB5521-85 Methodfordeterminationofalpha-amylase activityincerealandcerealproducts- Colorimetricmethod 本标准等效采用国际标准ISO3983-1977《谷物和谷物产品a-淀粉酶活性的测定 比色法》。 1主题内容和适用范围 本标准规定了用比色法测定谷物和谷物产品a一淀粉酶活性所用仪器、试剂、分析步骤和结果计 算。 本标准适用于测定谷物和谷物产品a一淀粉酶活性，也可用于测定源于真菌或细菌的a-淀粉酶干 粉的活性。 2 定义 1L溶剂从1g样品中所提取的酶，在规定条件下，每秒钟降解1.024x10-5单位的刀一极限糊精 底物溶液，则该样品的a一淀粉酶活性等于一个单位，极限糊精是被fi-淀粉酶完全降解了的淀粉产 物。 3 原理 酶降解刀一极限糊精底物溶液，经过不同的反应时间，将反应混合物等分加到碘溶液中。随着反 应时间的增加而使颜色强度降低，以测定酶活性。 4 试剂 4.1碘 (GB678-77)1 4.2 碘化钾 (GB1272-77)1 4.3 冰乙酸 (GB676-78); 4.4 硫酸 (GB625-78), 4.5 无水乙酸钠 (GB694-81)t 4.6 抓化钙; 4.了可溶性淀粉、‘ 注:1)可采用Liatner淀粉或质里相当的国产可溶性淀粉。浙江菱湖化工试剂厂产品符合要求。 4.8 浮石粉， 4.，碘贮备液: 称取11.0g碘化钾溶于少量水中，加入5.509结晶碘，搅拌至碘完全溶解。再定容至250mL，置 于棕色瓶中，在暗处贮存，此溶液可保存一个月; 4.10 碘稀释液: 称取40.09碘化钾溶于水中，加4.00mL碘贮备液，并稀释至1L，用时现配，不可过夜， 中华人民共和国商业部1988一12-31批准 1989一09;一01实施 CB 5521一 .8 4.11 缓冲液: 称取164g无水乙酸钠溶于水中，加人120mL冰乙酸用水定容至1L, 4.12 0.2% (m/犷)氛化钙溶液， 4.13 0.05mol/L硫酸溶液; 4.14 fl-淀粉酶溶液: 称取log有酶活性的黄豆粉 (粗细度为通过1.5mm孔筛)，加人85rnL水和15mLO.05mol/L硫 酸充分搅匀，静置15min，抽滤，该滤液用于制备冬极限糊精底物溶液; 4.15 ,B一极限糊精底物溶液: 称取5.00g(于基)可溶性淀粉于小烧杯中，加人约20mL水混匀，将其边搅拌边缓慢倒人盛有 100mL沸水的500mL高型烧杯中，并用洗瓶将小烧杯中的淀粉全部转移至高型烧杯中，继续搅拌并 加热，缓慢煮沸2min。加盖表面皿，在自来水中冷却至30℃以下，加入25mL缓冲溶液及50mL刀- 淀粉酶液，在室温下放置20h，加人1勺浮石粉，将此溶液在1Omin之内缓慢煮沸，然后继续沸腾 5min以上。冷却至300C以下，用水定容至250mL,摇匀，过滤。滤液中加几滴甲苯，此溶液的pH 值应为4.7t0.1，在25℃以下可连续使用五天。 5 仪器 5.1恒温水浴，30士0.1℃。 5.2 恒温水浴，2010.1℃。 5.3 分光光度计或比色计， 石.4 秒表. 5.5 筛子:孔径为1.Omm,1.5mm) 5.6 pH计。 分析步骤 6.1分光光度计及其空白调整: 将分光光度计连接稳压电源，预热20min,调整波长为575nm游2.OmL抓化钙溶液加到10.0mL 稀碘溶液中，然后以适量的水V,稀释 (加水量一般为2。一40mL,V。详见6.2),混匀后达到20C，用 1cm比色皿进行测试，调节仪器狭缝宽度，使吸光度为零。 6.2 底物溶液的校准: 分别吸取5.OmL/3一极限糊精溶液和15.0mL