动物细胞培养技术研究进展.pdf

维普资讯 2007年 8月 重庆文理学院学报 (自然科学版) Aug．，2007 第 26卷 第4期 JournalofChongqingUniversityofArtsandSciences(NaturalScienceEdition) V0L26 No．4 动物细胞培养技术研究进展 孔 永 ，秦秀云 (1．西南大学 生命科学学院，重庆 北碚 400715；2．山东省东营市第一中学，山东 东营 257091) [摘 要]动物细胞培养是生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法，可分为原代和传代 培养，有贴壁、悬浮和固定化培养等培养方式．细胞生长具有特殊的生物学性质，需要无菌、恒 温和充分的营养环境．动物细胞培养技术在拥有广阔的发展空间和光明前景的同时也面l临着 诸多问题和挑战． [关键词]细胞培养；微载体；中空纤维；微囊；生物反应器 [中图分类号]Q813．1 [文献标识码]A [文章编号]1673—8012(2007)04—0054—03 1885年，W Roux尝试使组织离体培养，被认为是组 为有限细胞系／株；在细胞传代的过程中，有些因发生遗 织细胞培养技术的萌芽 ；1907年Harrison和 1912年 Car— 传突变获得了持久性增殖能力的细胞称为无限细胞系／ rel开始把组织培养作为一种方法，用于研究离体动物细 株． 胞的培养 ，标志着细胞培养技术(Cellculturetechnology) 2 体外培养动物细胞的生物学特性 的诞生．此后，随着抗生素、培养基 、培养装置以及工艺方 动物细胞无细胞壁，机械强度低，对剪切力敏感， 法的不断改进，动物细胞培养 (Animalcellculture)的研 适应环境能力差；倍增时间长，生长缓慢，易受微生物 究和应用逐步增多和深入 ，．发展至今 已成为在生物、医学 污染；对生长环境和培养环境要求苛刻 J． 研究和应用中广泛采用的技术方法，利用细胞培养开展 2．1 细胞生命周期性变化… 体外试验 ，成为了阐释生命现象、发病机理和筛选药物的 体外培养的细胞从适应环境、旺盛生长到由于 自身 重要手段；利用细胞培养技术结合细胞融合 (Cellfu一 和环境限制缓慢或停滞生长经历一个周期变化． 8ion)、细胞杂交 (Cellhybridization)以及转基因(Trans． 1．潜伏期(Latentphase) gene)技术进行基因重组、组织构建是遗传和组织工程的 细胞从接种到适应新环境生长繁殖的一段时间，此 重要工具 ；利用细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生 间细胞胞质回缩，代谢缓慢． 长因子、疫苗和单抗等，已成为医药生物技术产业的重要 2．指数生长期 (Logarthmicgrowthphase) 部分…． ． 指数生长期是细胞活力最好的时期 ，细胞增殖旺盛． 1 基本概念 在接种细胞数量适宜的情况下，指数生长期持续3～5d 细胞培养是指从体内组织取出细胞模拟体内生存环 后，随细胞数量不断增多，生长空间日趋减少，营养环境 境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使其 恶化，呈现接触抑制 (Contactinhibition)．恶性细胞则由 生长繁殖并维持结构和功能的一种培养技术．从体内取 于营养成分的消耗和细胞代谢产物的影响而发生密度抑 出细胞首次培养即为原代培养(PrimaryCulture)，这是细 制(Densityinhibition)． 胞培养的最初和必经阶段．当原代培养细胞生长到一定 3．稳定期 (Stagnatephase) 时期，受到群体环境限制，就需要转移到另一容器才能继 细胞数量达到饱和密度后