HPLC法测定黄芪中黄芪甲苷含量.doc

HPLC法测定黄芪中的黄芪甲苷含量 摘　要：用HPLC法测定了黄芪甲苷含量.样品从东北黄芪中提取，用色谱纯甲醇溶解并稀释，采用YWG-C18柱，流动相为甲醇，在205 nm下检测，灵敏度为0.1 AUFS,测定了黄芪甲苷的含量.平均回收率为96.1%，RSD为2.15%，结果表明，样品浓度在0.01～0.2 mg/mL之间与峰面积成良好的线性关系. High-performance Liquid Chromatographic Determination ofAstragaloside in Astragalus membranaceus(Fisch.)Bunge. Tian Feng，Deng Yingjie（Department of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015） Abstract：A sensitive method was developed to determine astragaloside by high-performance liquid chromatography with the C18 column.The mobile phase was methanol and the UV absorbency was monitored at 205 nm.This assay demonstrated that astragaloside had adequate sensitivity and selectivity to measure the concentrations of astragaloside in Astragalus membranaceus(Fisch.)Bunge.Key words：high performance liquid chromatography；astragaloside;Astragalus membranaceus(Fisch.)Bunge.▲ 　　黄芪为常用中药，素有“补药之长”之称，具有益气固表，利尿托毒等功效.黄芪药用价值很高，临床上常用来治疗非特异性免疫功能低下、乙肝和心血管系统疾病.黄芪甲苷作为黄芪成分之一，其化学结构如图1所示，它具有降压、抗炎、稳定红细胞膜、提高血浆cAMP含量，促进小鼠再生肝DNA合成和增强免疫功能等多种作用〔1〕.因此在研究黄芪过程中，我们对其成分黄芪甲苷进行了含量测定方法研究.已有的测定方法多为薄层扫描法〔2〕和香草醛-硫酸比色法〔3〕，前者操作繁琐，背景干扰多，误差较大；后者空白吸收值高，受时间因素干扰大，均难以准确测定.本文试用HPLC法测定黄芪甲苷的含量.其样品浓度的范围在0.01～0.2 mg.mL之间与峰面积呈线性，该法灵敏度高，重现性好，可准确地测定东北黄芪甲苷的含量. Fig.1　The formulation of astragaloside 1　仪器与方法 　　仪器：Waters高效液相色谱仪，510型泵，490E紫外检测仪.对照品　黄芪甲苷购自中国药品生物制品检定所.样品　黄芪饮片(生品)，购自沈阳京盛药店，本校许春泉教授鉴定为东北黄芪.试剂　乙腈(色谱纯，天津四友生物医学公司)、甲醇(色谱纯，天津四友)、正丁醇(分析纯)、乙醚(分析纯)、水、重蒸馏水、去离子水、中性氧化铝(层析用)、轻质氧化镁(AR). 2　方法与结果 2.1　色谱条件色谱柱：YWG18柱250 4.6 mm 10μL，大连依利特科学仪器有限公司；流动相：甲醇(色谱纯)；流速：0.8 ml/min；检测波长：205 nm；灵敏度：0.1AUFS.2.2　标准曲线的绘制精密称取10.03 mg黄芪甲苷标准品，置于50 mL容量瓶中，加入色谱纯甲醇溶解并定容，分别精密吸取0.5、1.5、2.5、5、10 mL用甲醇稀释并定容于10 mL容量瓶中，用0.45 μ微孔滤膜过滤，进样20 μL，按上述色谱条件测定.在tR=3.375左右有唯一吸收峰，以峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，得一工作曲线.回归方程为A=0.171 7C+0.465 7，r=0.999 6，线性范围0.01～0.2 mg/mL-1，如表1所示. Tab.1　The concentration and peak area of the standard sample C／(mg.mL-1)×10-1Peak area/×1060.10.483 00.30.507 80.50.552 11.00.633 02.00.820 0 2.3　精密度实验精密称取黄芪甲苷对照品4.50 mg，用甲醇溶解并定容于10 mL容量瓶中，精密吸取20