高效液相色谱一荧光检测法同时测定人体尿液中的.pdf

第27卷第1期 分析科学学报 2011年2月 V01．27 No．1 JOURNAI。()FANAI。YTI(、AI，S(、IENCE Feb． 2011 文章编号：1006—6144(2011)ol—002l—05 高效液相色谱一荧光检测法同时测定人体尿液中的 多种蝶呤类化合物 崔盼盼，万益群。 (南昌大学分析测试中心，江西南昌330047) 摘要：建立了高效液相色谱一荧光检测法同时测定人体尿液中的蝶呤、新蝶呤、生物蝶 呤和墨蝶呤。尿液在酸性条件下经碘一碘化钾溶液氧化30min，滴加抗坏血酸还原液 后，可进行液相色谱分析。色谱柱为DiamonsilC18柱，用体积比9：10的水一甲醇为流动 相，流速为1．OmL／min，荧光检测波长为．：I。。一360nm，A。=445nm。新蝶呤、生物蝶 呤、蝶呤和墨蝶呤的线性范围分另q是O．005～1．5弘g／mL、0．05～2．0肛g／mL、O．01～ 1．Opg／mL和0．3～10．0pg／mL，检出限依次为0．003pg／mL、O．002肛g／mL、O．001 弘g／mL和0．15弘g／mL。加标平均回收率在84．8％～120．o％之间。用该方法测定了 健康人、普通病人和癌症病人尿样中的蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤，发现癌症病人 尿样中的新蝶呤水平与健康人和普通病人相比有所升高，生物蝶呤水平有所降低。该 方法准确，可行，适用于临床上尿样中蝶吟类化合物的检测。 关键词：蝶呤类化合物；人体尿液；高效液相色谱；荧光检测 中图分类号：0657．7+2文献标识码：A 蝶呤类化合物(Pteridines)在生物体代谢过程中起重要的辅助作用，可作为体内“淋巴细胞一巨噬细胞 轴”所介导的细胞免疫防御系统激活程度的标志物，体液中其水平的高低反映了体内细胞免疫状态，已用 thopterin)、异黄蝶呤(Isoxanthopterin)、蝶呤一6一羧酸(Pterin一6一carboxylic 呤类化合物相对研究较少¨柚]。墨蝶呤是蝶呤类化合物的一种，目前主要研究对象为动物细胞及人体脑 脊液，对人体尿液中墨蝶呤含量检测的研究鲜有报道。 本文系统探讨了人体尿液中蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤的色谱分离条件，同时考察了尿液的前 处理方法，在此基础上，建立了四种蝶呤类化合物同时分析的新方法，并应用于健康人、普通病人和癌症病 人尿样检测，取得了较好的效果。 1 实验部分 1．1仪器与试剂 器厂)；MS2型迷你振荡器(广州仪科实验室技术有限公司)；Millipore_QGradient超纯水装置(美国，Mi卜 lipore公司)。 收稿日期：2010一06一08修回日期：2010—09一02 基金项目：国家自然科学基金(No；江西省自然科学基金(No．0620049) 。通讯作者：万益群，男，教授，博士研究生导师，研究方向：生命化学及色谱分析． 21 万方数据 第1期 崔盼盼等：高效液相色谱一荧光检测法同时测定人体尿液中的多种蝶呤类化合物 第27卷 蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤标准品均购自于美国Sigma公司；甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂均 为分析纯；水为超纯水。 1．2标准溶液的配制 准确称取适量的蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤的标准品分别置于4个25mI。的棕色容量瓶中，加 数滴1．Omol／L 呤90．O pg／mI。、生物蝶呤80．Opg／mL和墨蝶呤74．Opg／mL的标准储备液，置于冰箱内4℃保存，使用 时稀释至所需要的浓度。 1．3样品前处理 取晨尿1．OmL置于5mL塑料离心管中，加6．Omol／L盐酸1～2滴，O．05mol／L碘一碘化钾氧化液 1．OmL，于暗处放置30 min，滴加0．05mol／L抗坏血酸还原液1．OmL，摇匀，加水至5．0mL，经O．45