基因重组法构建表柔红霉素高产菌株-中国药科大学学报！.PDF

学 报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１０，４１（３）：２８３－２８８ ２８３ 基因重组法构建表柔红霉素高产菌株 １ １，２ １，３ １ １ １ １ 陈继业 ，黄　佳 ，李伟平 ，李继安 ，陈代杰 ，朱宝泉 ，邵　雷 １ （上海医药工业研究院创新药物与制药工艺国家重点实验室（筹），上海２００４３７； ２ ３ 中国药科大学生命科学与技术学院，南京２１０００９；河南工业大学生物工程学院，郑州４５０００１） 摘　要　表柔红霉素是抗肿瘤药表阿霉素的半合成前体。通过中断ｄｎｍＶ基因，并将酮基还原酶ａｖｅＢ 基因导入，可 Ⅵ 以将柔红霉素产生菌改造成表柔红霉素产生菌。本研究通过此方法得到了产表柔红霉素的基因工程菌ｍＨＪ０２３０１，在此 基础上构建柔红霉素生物合成基因ｄｎｒＵ的同框敲除质粒ｐＹＧ１１１６，将其转入原有的表柔红霉素产生菌ｍＨＪ０２３０１，通过 同源重组双交换的方法，将ｄｎｒＵ基因内部编码１５３个氨基酸的序列敲除。从而得到ｄｎｒＵ基因失活的突变株ｍＹＧ１１１６Ｅ， 发酵验证表明该突变株表柔红霉素发酵单位比出发菌株提高了约４０％。 关键词　表柔红霉素；同源重组；基因置换；基因敲除 中图分类号　Ｑ７８４　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１０）０３－０２８３－０６ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆａｈｉｇｈｅｐｉｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎｐｒｏｄｕｃｉｎｇｓｔｒａｉｎｂｙｇｅｎｅｒｅｃｏｍｂｉｎａ ｔｉｏｎ １ １牞２ １牞３ １ １ １ １ ＣＨＥＮＪｉｙｅ牞ＨＵＡＮＧＪｉａ 牞ＬＩＷｅｉｐｉｎｇ 牞ＬＩＪｉａｎ牞ＣＨＥＮＤａｉｊｉｅ牞ＺＨＵＢａｏｑｕａｎ牞ＳＨＡＯＬｅｉ １ ２ ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｆＮｅｗＤｒｕｇａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰｒｏｃｅｓｓ牞ＳｈａｎｇｈａｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙ牞Ｓｈａｎｇｈａｉ２００４３７牷Ｓｃｈｏｏｌｏｆ ３ ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牷ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ牞ＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈ ｎｏｌｏｇｙ牞Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００１牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　４′Ｅｐｉｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎｉｓｍａｊｏｒｐｒｅｃｕｒｓｏｒｆｏｒｔｈｅｓｅｍｉｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｅｐｉｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ牞ａｃｌｉｎｉｃａｌｌｙｉｍｐｏｒｔａｎｔ ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｎｔｉｂｉｏｔｉｃＢｙｍｅａｎｓｏｆｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｕｓｅｄｆｏｒｄｎｍＶｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔａｎｄａｖｅＢ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ Ⅳ ｉｎｔｏｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎｐｒｏｄｕｃｉｎｇｓｔｒａｉｎ牞ａｍｕｔａｎｔｓｔｒａｉｎ牞ｎａｍｅｄｍＨＪ０２３０１牞ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｔｈａｔｐｒｏｄｕｃｅｓ４′ｅｐｉ ｄａｕｎｏｒｕｂｉｎＡｎｉｎｆｒａｍｅｋｎｏｃｋｏｕｔｐｌａｓｍｉｄｗａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏｍＨＪ