葡萄球菌核酸酶的制备及性质研究 - 《中国药科大学学报》！.PDF

学 报 ２１４ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１７，４８（２）：２１４－２１９ 葡萄球菌核酸酶的制备及性质研究 洪　流，郎君超，贺冬梅，刘坤锋，吴　洁 （中国药科大学微基因药学实验室，南京２１０００９） 摘　要　为获得纯度较高的葡萄球菌核酸酶（ＳＮａｓｅ）以研究其与糖尿病的关系，构建基因工程表达菌ＥｃｏｌｉＢＬ２１／ｐＥＴ２８ａ ＨｉｓＳＮａｓｅ，诱导其表达可溶性胞外蛋白，并对纯化的ＳＮａｓｅ进行初步性质研究。采用分子生物学方法设计和构建含有 ＳＮａｓｅ基因的表达载体ｐＥＴ２８ａＨｉｓＳＮａｓｅ，再转入ＥｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）感受态细胞。经过乳糖诱导表达、超声破碎及镍柱亲和 色谱等纯化步骤后，以ＳＤＳＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定ＨｉｓＳＮａｓｅ，并对其性质进行了初步研究。结果表明，乳糖诱导后 Ｈｉｓ ＳＮａｓｅ能高效表达，亲和色谱后纯度高达８５％以上，且其具备较高的核酸酶活性，作用ｐＨ范围较广，有很好的耐热性。本 研究为进一步探究葡萄球菌核酸酶与糖尿病的关系奠定了基础。 关键词　糖尿病；葡萄球菌核酸酶；组氨酸标签；分离纯化 中图分类号　Ｑ７８９　　文献标志码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１７）０２－０２１４－０６ ｄｏｉ：１０．１１６６５／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－５０４８ 引用本文　洪　流，郎君超，贺冬梅，等葡萄球菌核酸酶的制备及性质研究［Ｊ］．中国药科大学学报，２０１７，４８（２）：２１４－２１９ Ｃｉｔｅｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅａｓ：ＨＯＮＧＬｉｕ，ＬＡＮＧＪｕｎｃｈａｏ，ＨＥＤｏｎｇｍｅｉ，ｅｔａｌＳｔｕｄｉｅｓｏｎｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｎｕｃｌｅａｓｅ［Ｊ］．ＪＣｈｉｎａ ＰｈａｒｍＵｎｉｖ，２０１７，４８（２）：２１４－２１９ ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｎｕｃｌｅａｓｅ  ＨＯＮＧＬｉｕ牞ＬＡＮＧＪｕｎｃｈａｏ牞ＨＥＤｏｎｇｍｅｉ牞ＬＩＵＫｕｎｆｅｎｇ牞ＷＵＪｉｅ ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｉｎｉｇｅｎｅＰｈａｒｍａｃｙ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌｎｕｃｌｅａｓｅ牗ＳＮａｓｅ牘ａｎｄｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ牞 ｇｅｎｅｔｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａＥｃｏｌｉＢＬ２１／ｐＥＴ２８ａＨｉｓＳＮａｓｅｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ牞ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｓｏｌｕｂｌｅｅｘｔｒａｃｅｌ ｌｕｌａｒｐｒｏｔｅｉｎＳＮａｓｅｗａｓｉｎｄｕｃｅｄａｎｄｔｈｅａｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｒｅｓｅａｒｃｈｗａｓｍａｄｅｏｎｉｔＡｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＥＴ２８ａ ＨｉｓＳＮａｓｅｐｌａｓｍｉｄｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｔｈｅＨｉｓＳＮａｓｅｇｅｎｅｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＥｃｏｌｉＢＬ２１牗ＤＥ３牘 ｃｏｍｐｅｔｅｎｔｃｅｌｌｓＴｈｅｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｌａｃｔｏｓｅａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｕｌｔｒａｓｏｕｎｄｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄＮｉａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａ ｔｏｇｒａｐｈｙ牞ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＩｔｗａｓｔｈｅｎａｎａｌｙｚｅｄｂｙＳＤＳＰＡＧＥａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔＴｈｅｅｎｚｙｍａｔｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｆｏｒＳＮａｓｅｈａｓ ｂｅｅｎｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｓｔｕｄｉｅｄａｓｗｅｌｌＲｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆｔｈｅｃｏｒｒｅｃｔｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎＨｉｓ ＳＮａｓｅｗａｓｏｖｅｒ８５％ＳＮａｓｅｓｈｏｗｅｄｇｏｏｄａｃｔｉｖｉｔｙｗｉｔｈｉｎａｗｉｄｅｒａｎｇｅｏｆｐＨａ