一蛋白质的沉淀反应.DOC

实验一 蛋白质的沉淀反应一、实验目的通过实验加深对蛋白质亲水胶体两个稳定因素的认识。区分可逆的盐析沉淀和不可逆沉淀作用。二、试剂与器材 （一）试剂 1. 蛋白质溶液：取10ml蛋清，用蒸馏水稀释至100ml，搅拌均匀后，用纱布过滤。2. 饱和硫酸铵溶液 3. 硫酸铵粉末4. 2%硝酸银溶液 5. 0.5%醋酸铅溶液6. 1%硫酸铜溶液 7. 0.1%醋酸溶液8. 10%醋酸溶液 9. 饱和氯化钠溶液10. 10%氢氧化钠溶液 11. 1%醋酸溶液12. 饱和苦味酸溶液 13. 0.01%氢氧化钠溶液（二）器材试管、试管架、滴管、玻璃棒、量筒、水浴锅三、操作步骤（一）蛋白质的分段盐析的可逆沉淀反应1.取一支试管，加入浓蛋白质溶液2ml、饱和硫酸铵溶液2ml，混匀，静置，观察结果。2.将试管内容物过滤（或取上清液）置另一支试管中，加硫酸铵粉末至饱和，观察析出的清蛋白，等沉淀析出后向试管中加入水，看沉淀是否重新溶解。（二）蛋白质的不可逆沉淀1.重金属沉淀蛋白质取3支试管，编号后按下表加入各种试剂，观察沉淀生成的颜色和量。管号试剂（滴）蛋白质（ml）0.01%氢氧化钠2%硝酸银0.5%醋酸铅1%硫酸铜1231 1 11 1 11 1 1现象2.生物碱试剂沉淀蛋白质取1支试管，加入蛋白质溶液2ml及1% 醋酸4~5滴。向管中加入饱和苦味酸溶液数滴，观察结果。3.加热沉淀蛋白质（1）取5支试管，编号后按下表加入各种试剂（试剂量为：滴）。将各管混匀，观察记录各管溶液情况。（2）将上列各管放入沸水中加热10分钟，注意观察比较各管的沉淀情况。试剂管号 1 2 3 4 5蛋白质溶液 10 10 10 10 10 0.1%醋酸 5饱和NaCl 210%NaOH 2蒸馏水 7 2 210%醋酸 5现象加热后现象四、结果分析与讨论实验二 酶的性质一、实验目的：1.学会酶的制备2.验证酶的专一性二、试剂与器材（一）试剂1. 1%淀粉溶液2. 1%蔗糖溶液3. 2%过氧化氢4. 还原性铁粉、5. PH6.8的缓冲溶液 取0.2mol/L Na2HPO4溶液772 mL，0.1 mol/L柠檬酸溶液228 mL，混合后即成。6. 班氏试剂 取柠檬酸钠173g和无水碳酸钠100g，溶于700 mL热蒸馏水中，冷却，慢慢倾入17.3% CuSO4溶液100mL（溶解17 gCuSO4.5H2O于100mL水中），边加边摇，加蒸馏水至1000 mL（二）材料自制唾液、发芽马铃薯（三）器材试管、恒温水浴锅、沸水浴锅、烧杯三、操作步骤（一）酶的高度的催化效率1.将发芽的马铃薯切成小块，分一半在沸水浴中煮沸几分钟。2.取3支试管编号，按下表操作管序H2O2 （ml）生马铃薯熟马铃薯铁粉现象13若干块23若干块331小匙3.观察各管中产生气泡的多少，并解释原因。（二）酶的高度的特异性1.唾液淀粉酶的制备 漱口后收入唾液于小烧杯，加10~15ml蒸馏水。2.煮沸唾液制备 取上述稀释唾液约5ml，在酒精灯上煮沸，冷却备用。3.取试管3支，按下表操作管序缓冲液淀粉液蔗糖溶液稀释唾液煮沸唾液现象120滴10滴/4滴/220滴10滴//4滴320滴/10滴4滴/4.各管摇匀，置37℃四、实验结果分析与讨论实验三 蛋白质等电点的测定 一、实验目的 1.学习蛋白质等电点的测定方法 二、实验原理蛋白质分子中含有游离氨基和羧基，因此，它是一种两性电解质，在碱性溶液中则解离成阴离子，在酸性溶液中则解离成阳离子。由此可知，蛋白质所带电荷的种类取决于溶液的pH值，在特定的pH条件下，某种蛋白质分子所带正负电荷相等，静电荷为零，这一PH称为该蛋白质的等电点。在等电点pH条件下，蛋白质为中性，较稳定。其物理性质如导电性、溶解度等都表现为最低值，易发生沉淀，而且沉淀完全。三、试剂 pH分别为3.5,4.1,4.7,5.3,5.9的醋酸溶液，酪蛋白-醋酸钠溶液