酶法提取猪皮中胶原蛋白的工艺优化.docx
吉林农业大学
学士学位论文
题目名称:酶法提取猪皮中胶原蛋白的工艺优化
学生姓名:王发明
院系:生命科学学院专业年级:07级生物技术
指导教师:三莘 职称:教授
2011年5月17日
TOC\o1-5\h\z题目 I
摘要及键词 I
1前言 1
2实验材料和方法 1
2.1实验材料和仪器 1
2.1.1实验材料及试剂 1
2.1.2实验仪器 1
2.2实验方法 1
2.2.1猪皮的简单预处理 1
2.2.2胶原蛋白的提取和纯化 1
2.3蛋白质含量测定 1
2.3.1考马斯亮蓝法 1
2.3.1.1标准曲线的制作 1
2.3.1.2样品蛋白的测定 2
2.3.1.3蛋白质含量计算 2
3结果与分析 2
\oCurrentDocument3.1酶处理条件对胶原蛋白提取量的影响 2
\oCurrentDocument3.1.1酶处理pH值对胶原蛋白提取量的影响 2
\oCurrentDocument3.1.2酶处理时间对胶原蛋白提取量的影响 3
\oCurrentDocument3.1.3酶处理温度对胶原蛋白提取量的影响 3
3.1.4加酶量对胶原蛋白提取量的影响 4
4讨论 4
5结论 5
参考文献 5
致谢 6
酶法提取猪皮中胶原蛋白的工艺优化
姓 名:王发明
专 业:生物技术
指导教师:王莘
摘要:目的:对猪皮中进行胶原蛋白提取。方法:用中性蛋白酶预处理猪皮,再用考马斯亮蓝法测得胶原蛋白的含量。结果:在单因素试验的基础上,通过对比实验确定胶原蛋白提取的最佳条件:酶处理pH6,加酶量(E/S)400U/g,温度40°C,处理时间2h。
关键词:胶原蛋白;酶处理;考马斯亮蓝
Semi-bionicextractionofpigskintooptimizethetechnologyof
collagen
Name:WangFamingMajor:BiotechnologyTutor:WangXin
Abstract:purpose:Thepigskinextractionofcollagen.Methods:useneutralproteasepretreatmentpigskin,reoccupytestmeasuredMaSiLiangbluemethodofcollagencontent.Results:onthebasisofsinglefactorexperiment,throughthecontrastexperimentdeterminedthebestconditionofcollagenextractionenzymetreatmentpH6,add,enzymequantity(E/S)400U/g,temperature40°C,theprocessingtime2h.Keywords:Collagen;Enzymetreatment;CoomassieBrilliantBlue
1前言
猪皮中的蛋白质含量高达33%,其中胶原蛋白含量为87.8%[1],而瘦猪肉的蛋白含量仅为18%左右。由此看来猪皮中的蛋白质含量远高于瘦猪肉,其营养价值十分可观。此外胶原蛋白具有特殊的结构与功能,并具有皮肤保湿等的用途,开发胶原蛋白产品已经成为人们研究的热点[樵随着生物和高分子科学的不断发展,人们会对此有更深的了解和认识,因此开发胶原蛋白资源具有广阔的前景。
本论文实验研究主要利用中性蛋白酶处理猪皮,采用考马斯亮蓝方法测定猪皮中的胶原蛋白含量的方法。通过酶的不同处理条件,胶原蛋白提取量的比较来确定胶原蛋白提取的最佳条件,是对胶原蛋白的提取进行的基础性研究工作。2材料和方法
2.1实验材料和仪器
2.1.1实验材料及试剂
猪皮,中性蛋白酶,牛血清蛋白,无水乙醇,NaCl溶液,蒸馏水,考马斯亮蓝溶液
2.1.2实验仪器
电动搅拌器,电子天平,恒温水浴锅,离心机,分光光度计
2.2实验方法
2.2.1猪皮的简单预处理⑶
将皮下脂肪剔除,切成10mmx10mm的小块,用35C的清水洗2次,再用无水乙醇浸泡,振荡约10小时,弃掉有机溶剂。
2.2.2胶原蛋白提取和纯化
称取一定量经简单预处理的皮块于烧杯中,加入相应量的中性蛋白酶,并用缓冲溶液控制pH值,在一定温度下搅拌一定时间,离心去残渣⑷,上清液经考马斯亮蓝法测得蛋白质提取量⑸。
2.3蛋白质含量的测定
2.3.1考马斯亮蓝法
2.3.1.1标准曲线的制作⑹
称取10mg牛血清蛋白用蒸馏水定容至100ml(100ug/ml