酶法提取猪皮中胶原蛋白的工艺优化.docx

吉林农业大学

学士学位论文

题目名称：酶法提取猪皮中胶原蛋白的工艺优化

学生姓名：王发明

院系：生命科学学院专业年级:07级生物技术

指导教师：三莘 职称：教授

2011年5月17日

TOC\o1-5\h\z题目 I

摘要及键词 I

1前言 1

2实验材料和方法 1

2.1实验材料和仪器 1

2.1.1实验材料及试剂 1

2.1.2实验仪器 1

2.2实验方法 1

2.2.1猪皮的简单预处理 1

2.2.2胶原蛋白的提取和纯化 1

2.3蛋白质含量测定 1

2.3.1考马斯亮蓝法 1

2.3.1.1标准曲线的制作 1

2.3.1.2样品蛋白的测定 2

2.3.1.3蛋白质含量计算 2

3结果与分析 2

\oCurrentDocument3.1酶处理条件对胶原蛋白提取量的影响 2

\oCurrentDocument3.1.1酶处理pH值对胶原蛋白提取量的影响 2

\oCurrentDocument3.1.2酶处理时间对胶原蛋白提取量的影响 3

\oCurrentDocument3.1.3酶处理温度对胶原蛋白提取量的影响 3

3.1.4加酶量对胶原蛋白提取量的影响 4

4讨论 4

5结论 5

参考文献 5

致谢 6

酶法提取猪皮中胶原蛋白的工艺优化

姓 名：王发明

专 业：生物技术

指导教师：王莘

摘要：目的：对猪皮中进行胶原蛋白提取。方法：用中性蛋白酶预处理猪皮，再用考马斯亮蓝法测得胶原蛋白的含量。结果：在单因素试验的基础上，通过对比实验确定胶原蛋白提取的最佳条件：酶处理pH6,加酶量(E/S)400U/g，温度40°C,处理时间2h。

关键词：胶原蛋白；酶处理；考马斯亮蓝

Semi-bionicextractionofpigskintooptimizethetechnologyof

collagen

Name:WangFamingMajor:BiotechnologyTutor:WangXin

Abstract：purpose:Thepigskinextractionofcollagen.Methods:useneutralproteasepretreatmentpigskin,reoccupytestmeasuredMaSiLiangbluemethodofcollagencontent.Results:onthebasisofsinglefactorexperiment,throughthecontrastexperimentdeterminedthebestconditionofcollagenextractionenzymetreatmentpH6,add,enzymequantity(E/S)400U/g,temperature40°C,theprocessingtime2h.Keywords:Collagen;Enzymetreatment;CoomassieBrilliantBlue

1前言

猪皮中的蛋白质含量高达33%,其中胶原蛋白含量为87.8%［1］，而瘦猪肉的蛋白含量仅为18%左右。由此看来猪皮中的蛋白质含量远高于瘦猪肉，其营养价值十分可观。此外胶原蛋白具有特殊的结构与功能，并具有皮肤保湿等的用途，开发胶原蛋白产品已经成为人们研究的热点［樵随着生物和高分子科学的不断发展，人们会对此有更深的了解和认识，因此开发胶原蛋白资源具有广阔的前景。

本论文实验研究主要利用中性蛋白酶处理猪皮，采用考马斯亮蓝方法测定猪皮中的胶原蛋白含量的方法。通过酶的不同处理条件，胶原蛋白提取量的比较来确定胶原蛋白提取的最佳条件，是对胶原蛋白的提取进行的基础性研究工作。2材料和方法

2.1实验材料和仪器

2.1.1实验材料及试剂

猪皮，中性蛋白酶，牛血清蛋白，无水乙醇，NaCl溶液，蒸馏水，考马斯亮蓝溶液

2.1.2实验仪器

电动搅拌器，电子天平，恒温水浴锅，离心机，分光光度计

2.2实验方法

2.2.1猪皮的简单预处理⑶

将皮下脂肪剔除，切成10mmx10mm的小块，用35C的清水洗2次，再用无水乙醇浸泡，振荡约10小时，弃掉有机溶剂。

2.2.2胶原蛋白提取和纯化

称取一定量经简单预处理的皮块于烧杯中，加入相应量的中性蛋白酶，并用缓冲溶液控制pH值，在一定温度下搅拌一定时间，离心去残渣⑷，上清液经考马斯亮蓝法测得蛋白质提取量⑸。

2.3蛋白质含量的测定

2.3.1考马斯亮蓝法

2.3.1.1标准曲线的制作⑹

称取10mg牛血清蛋白用蒸馏水定容至100ml（100ug/ml