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第三章 酶动力学 多底物酶反应动力学（续） 一 Ordered BiBi 动力学公式推导 多底物动力学公式推导比单底物的复杂很多，因此用King-Altman图解法进行推导。 分母 简化表示法系数的速度方程 Km表达式 Haldane关系式 分母各项逐项转换 分子分母各项都有V2，约去后即可得到动力学速度方程。 转换操作要点： 1）设法利用动力学常数与简化表示法系数关系式。 2）非用不可时才用多定义的KiP和KiB。 3）直接转换不便时利用Haldane关系式把num2变为num1。 速度方程： 初速度方程 King-Altman方法步骤小结 ?1)??写出反应历程。 2)??安排成封闭几何图型。 3）写出n-1线的所有可能图形扣除封闭n-1线图。 4）根据图形写出各个[Ei]/[Et]表达式。 5）写出分母，为所有分子之和。 6）写出生成产物的速度方程，简化表达式。 7) 写出各动力学常数表达式，包括V,Km,Ki,Keq。 8）利用第七步的表达式变换第六步的速度方程，得到用动力学常数表示的速度方程。 9）只讨论初速度时，产物浓度为0，得到初速度方程。 双倒数作图及讨论 选择一个底物，如A为变化底物(variable), 另一底物B固定于某一浓度（fixed changing), 根据双倒数公式，以1/V对1/[A]作图可得直线，其斜率为KmA/V1+KiAKmB/V1[B], Y轴截距为1/V1+ KmB/V1[B]。所以当[B]增大时，直线的斜率降低， Y轴截距也降低。 由双倒数公式，以B为变化底物，A为固定变化，以1/V对1/[B]作图可得直线，当[A]增大时，直线的斜率降低， Y轴截距也降低。 任选二个B的浓度B1和B2，代入双倒数公式得到二个二元一次方程，该方程组的解即为两条直线的交点坐标： 双倒数作图 二次作图 1/V对1/[A] 为一次作图，二次作图公式： Slope = KmA/V1+KiAKmB/V1[B], Yint = 1/V1+ KmB/V1[B]。 一次作图斜率对1/[B]作图的截距KmA/V1，斜率KiAKmB/V1；一次作图截距对1/[B]作图的截距1/V1，斜率KmB/V1。 由两个二次作图的斜率和截距的值可以计算得到V1, KmB, KmA, KiA等各参数。 二 Ping Pong BiBi 的动力学公式 三 快平衡随机反应 四 动力学历程讨论及判断方法 实验 1. 选择变化底物和固定变化底物； 2. 按照单底物动力学底物浓度选择原则两个底物各选定5－6个左右浓度； 3. 每个固定变化底物浓度下进行变化底物不同浓度的酶反应速度测定； 4. 全部固定变化底物浓度实验完成后作双倒数一次作图，得到各直线斜率和截距； 5. 讨论动力学机制，作二次作图得到各动力学参数。 课外练习（记分） 用King-Altman方法推导乒乓双双反应的动力学速度方程，并作初速度方程的双倒数作图及讨论。 The END ? 推导作为作业，同学们课后完成。 * * 酶 学 Enzymology 2）组成封闭图形： 4）写[Ei]/[ET]表达式： Ki表达式也是两个系数的比值，其注脚字母分母比分子多该配基，但不能是Km表达式。Ki可能有多个表达式，但只能按需选用其中一个。 表示不同B浓度的双倒数直线将交于一点。 *