酶联免疫吸附试.ppt

;ELISA的基本原理;④用洗涤的方法去除未结合的酶标抗原（或抗体），最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。 ⑤加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物。 ⑥产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来定性或定量分析。;;ELISA的类型;一、双抗体夹心法;二、间接法测抗体 ;三、酶标抗原竞争法;间接ELISA方法的建立;ELISA操作步骤;3、封闭：各孔加入封闭液200ul，37℃作用1h； 4、洗涤； 5、加被检血清：将血清样品稀释至最佳浓度，每孔100μL，每个样本两孔，每块板同时设阴性、阳性及空白对照各两孔，37℃作用30min； 6、洗涤； ;7、?酶标二抗：稀释HRP标记羊抗猪IgG，每孔100μL，37℃作用30min； 8、洗涤； 9、显色：加新鲜配制的TMB底物液每孔100μL，室温避光作用15min； 10、加终止液：加50μL?2mol/L硫酸； 11、读数：用酶标仪检测OD450值。; 血清学方法有很多种, 如传统的琼脂扩散( A G ID ) 、 血凝抑制( H A / H I ) 、 乳胶凝集、 试管凝集、补体结合等方法，但这些方法不是最合适的检测方法。EILSA技术与其有着不同的特点： 1、灵敏度高。ELI SA是通过酶促反应放大检测信号, 从而提高检测的灵敏度, 其检测限可达 ng 甚至pg 水平, 可做定量测定。 2、特异性强。ELI SA的每一步体的特异性识别过程, 结构类似物、 有色物质、 荧光物质等对检测的影响很小。 3、样品的预处理过程和 ELI SA的操作步骤简单快捷，有的试剂盒仅需1~2个小时即可得出检测结果，并且可同时检测数十甚至上百个样品。 4、设备简单，适用于基层。;　ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期??断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大。