DB35∕T 1852-2019 猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RT-PCR检测方法.docx
ICS11.220B41
DB35
福建省地方标准
DB35/T1852—2019
猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光
RT-PCR检测方法
Detectionmethodsofreal-timeRT-PCRforPorcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus
2019-09-11发布2019-12-11实施
福建省市场监督管理局发布
DB35/T1852—2019
I
目次
前言 II
1范围 1
2规范性引用文件 1
3缩略语 1
4疾病概述 1
5实验室诊断 2
6综合判定 4
附录A（规范性附录）试剂的配制 5
附录B（资料性附录）扩增产物参考基因序列 6
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II
前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
本标准由福州海关提出并归口。
本标准起草单位：福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心、深圳市易瑞生物技术有限公司、厦门瑞德利校准检测技术有限公司、东莞市中鼎检测技术有限公司、深圳市中鼎检测技术有限公司。
本标准主要起草人：郑腾、张体银、朱海、杨荣淇、付辉、张险朋、柯丽群、张志灯、林杰、林季敏、王武军、唐寰宇、张婷、白泉阳。
DB35/T1852—2019
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猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RT-PCR检测方法
1范围
本标准规定了猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RT-PCR检测方法。
本标准适用于猪繁殖与呼吸综合征病毒的流行病病学调查、监测和诊断。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB19489实验室生物安全通用要求
3缩略语
下列缩略语适用于本文件。
Ct值：循环阈值（CycleThreshold）
DEPC：焦碳酸二乙酯（DiethyPyrocarbonate）
PRRS：猪繁殖与呼吸综合征（PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome）
PRRSV：猪繁殖与呼吸综合征病毒（PorcineReproductiveandRespiratorySyndromeVirus）
RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）
RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（ReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction）
4疾病概述
4.1病原
PRRS是PRRSV引起的猪的一种高度传染性疾病，又称“猪蓝耳病”。PRRSV为动脉炎病毒属的成员，是一种有囊膜的单股正链RNA病毒，病毒粒子呈球型，直径为55nm～60nm。病毒有2个血清型，即美洲型和欧洲型，我国分离到的毒株为美洲型。病毒对酸、碱都较敏感，尤其很不耐碱，一般的消毒剂对其都有作用，但在空气中可以保持3周左右的感染力。
4.2流行病学
PRRSV可感染各种品种、不同年龄和用途的猪，以妊娠母猪和1月龄以内的仔猪最易感。患病猪和带毒猪是本病的重要传染源。主要传播途径是接触感染、空气传播，也可通过胎盘垂直传播。持续性感染是PRRSV流行病学的重要特征。PRRSV可在感染猪体内存在很长时间。猪在感染病毒后2～14周均可通过接触将病毒传播给其它易感猪。
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4.3临床诊断
妊娠后3个月的母猪如果感染PRRSV，则会表现流产、早产、胎儿自溶和木乃伊等典型特征。出生前后感染PRRSV的新生仔猪，呼吸困难、急促，同时出现眼周及眼睑水肿，结膜炎，蓝耳，食欲不振，发热，皮肤红斑，腹泻，震颤，毛发粗乱，厌食和神经症状。断乳仔猪感染PRRSV的典型临床症状表现为发热、肺炎、昏睡及精神萎靡，如果伴发细菌感染，则死亡率显著升高。
5实验室诊断
5.1设备、材料和试剂
5.1.1设备
5.1.1.1台式冷冻高速离心机（转速至少达到12000r/min以上）。
5.1.1.2微量可调移液器（100μL～1000μL、20μL～200μL、2μL～20μL、0.5μL～10μL）。
5.1.1.3冰箱（2℃~8℃和-20℃)。
5.1.1.4荧光定