生物制品的制备.ppt

⑥络合：清液在0℃下搅拌加入等体积0.2mol/LNaAc溶液和1/4体积1%十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）；0℃放0.5h；离心取沉淀。⑦洗涤：沉淀用NaAc，70%乙醇溶液反复洗涤5次，至无泡沫为止。第85页，共152页，星期日，2025年，2月5日第四节基因工程生物制品的制备（BiopreparatePreparationofGeneEngineering）一、建立分离纯化工艺的根据（referenceoftechniqueofisolationanddepuration）1、含目的产物的起始物料的特点（speciality）各种因素均对分离纯化技术和工艺有直接影响。这些因素包括：①菌种类型及其代谢特性。包括菌种的各种生物学性质，产物和副产物种类、产物在细胞内所处的位置，表达方式，代谢物种类，产物类似物、毒物和能降解产物的酶类等；第86页，共152页，星期日，2025年，2月5日②原材料和培养基的来源及其质量；③生产工艺和条件。包括灭菌方法和条件，生产方式（连续、批式、半连续），生产周期，生产能力，工艺控制条件、因素及方式等；④初始物料的物理、化学和生物学特性。包括产物浓度、主要杂质种类和浓度、盐的种类和浓度、溶解度、pH、粘度、流体力学性质和热力学性质等。第87页，共152页，星期日，2025年，2月5日2、物料中杂质的种类和性质（Varietyandcharacteristicofimpurity）杂质种类和性质包括相关性和非相关性杂质的含量、化学性质、结构、相对分子量、电荷性质及数量、生物学特性、稳定性、溶解度、分配系数、挥发性、吸附性能等。第88页，共152页，星期日，2025年，2月5日3、目的产物特性（specialityofproduction）产物特性主要有化学、物理和生物学特性，包括化学组成、相对分子质量、等电点、电荷分布及密度、溶解度、稳定性、疏水性、扩散性、扩散系数、分配系数、吸附性能、生物学活性、亲和性、配基种类、表面活性等。第89页，共152页，星期日，2025年，2月5日4、产品质量的要求（requirementsforqualityofproduction）产品质量标准和用途对产品纯度、生物活性、比活的要求。包括允许的杂质种类和最大允许含量，特殊杂质的种类和最大允许量，以及杂质对使用的影响，产品剂型、贮存稳定性等。第90页，共152页，星期日，2025年，2月5日二、分离纯化的基本过程（basicprocessofisolationanddepuration）分离纯化是极其重要的一环，这是由于工程菌经过大规模培养后，产生的有效成分含量很低，杂质含量却很高；另外由于基因工程药物是从转化细胞、不是从正常细胞生产的，对产品的纯度要求也高于传统产品。分离纯化要比传统产品困难得多。第91页，共152页，星期日，2025年，2月5日分离纯化一般不应超过4～5个步骤，包括细胞破碎、固液分离、浓缩与初步纯化、高度纯化直至得到纯品以及成品加工。流程如下图所示。第92页，共152页，星期日，2025年，2月5日发酵液细胞分离胞内产物胞外产物细胞破碎固液分离包涵体细胞碎片分离变性复性浓缩初步分离高度纯化制剂产品图3-8基因工程制品分离纯化的一般流程第93页，共152页，星期日，2025年，2月5日三、分离纯化的技术（techniqueofisolationanddepuration）分离纯化技术应满足下列要求：①技术条件要温和，能保持目的产物的生物活性；②选择性要好，达到较高纯化倍数；③收率要高；④要能直接衔接，不需要对物料加以处理或调整；⑤整个分离纯化过程要快，能够满足高生产率的要求。第94页，共152页，星期日，2025年，2月5日1、细胞破碎与固液分离（cellcrashingandsolidandliquidisolation）以大肠杆菌为宿主药物多为胞内产物，分离需经细胞收集、细胞破碎和细胞碎片分离等步骤。（1）细胞收集（cellcollection）：常用离心分离，膜过滤法（2）细胞破碎（cellcrashing）：细胞破碎方法有机械破碎法和非