生物制品的制备 (2).ppt

酶学破碎方法酶学破碎方法：利用溶解细胞壁的酶(外加的或细胞本身存在的酶)处理菌体细胞，使细胞壁受到破坏后，再利用渗透压、冲击等方法破坏细胞膜分为：外加酶制剂和自溶法。第23页，共77页，星期日，2025年，2月5日自溶作用自溶作用是利用生物体自身产生的酶来溶胞，而不需外加其他的酶。在微生物代谢过程中，大多数都能产生一种能水解细胞壁上聚合物的酶，以便生长过程继续下去。自溶作用：改变其生长环境（温度、ｐＨ、缓冲液），可以诱发产生过剩的这种酶或激发产生其它的自溶酶，以达到自溶目的。缺点：易引起所需蛋白质的变性，自溶后细胞悬浮液粘度增大，过滤速度下降。第24页，共77页，星期日，2025年，2月5日（2）提取（extraction）生物组织与细胞破碎后要立即进行提取。提取时，首先要根据活性物质的性质，①选择提取试剂。提取试剂主要有：水、缓冲溶液、盐溶液、乙醇、其他有机溶剂（如氯仿、丙酮等）。②考虑提取溶剂的用量及提取次数、提取时间。③注意提取的温度、pH、变性剂等因素。第25页，共77页，星期日，2025年，2月5日包括蛋白质、多肽和酶类等药物。分离纯化方法有：1.沉淀法：蛋白质、酶的初步纯化往往用沉淀法。原理是使蛋白质胶体颗粒破坏，从而沉淀蛋白质。常用的有盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、选择性沉淀法等。第二节各类生物制品的分离纯化方法一、蛋白质类制品的分离纯化方法第26页，共77页，星期日，2025年，2月5日(2)按分子大小分离的方法：有超滤法和透折法、凝胶层析法、超速离心法等。其中膜分离法可用于生物大分子物质的浓缩、分级和脱盐。第27页，共77页，星期日，2025年，2月5日(3)按分子所带电荷进行分离的方法氨基酸、多肽、蛋白质、酶均为两性电解质。它们具有等电点，在离开等电点的pH时便会带正或负电荷。例如某蛋白质等电点为7.0，当溶液pH为4.0时，分子则带有正电荷。由于具有该性质，利用带电性质进行分离是极其有效的方法。利用电学性质进行分离的方法有离子交换层析、电泳法、等电点聚焦法等。第28页，共77页，星期日，2025年，2月5日（4）亲和层析法大部分生物活性物质都有其作用的靶物质，如酶与底物（或抑制剂）、抗原与抗体、激素与受体等，它们之间有特异的亲合作用，利用该性质设计的特异层析分离技术称为亲和层析。亲和层析分离专一性强，操作简便，是当前应用很广泛的分离方法之一。第29页，共77页，星期日，2025年，2月5日核酸类药物生产方法主要有提取法和发酵法。提取法生产DNA和RNA，先提取核酸和蛋白质复合物，再解离核酸与蛋白质，然后分离RNA与DNA。发酵法主要用于生产单核苷酸。二、核酸类制品的分离纯化方法

第30页，共77页，星期日，2025年，2月5日由于各种糖类制品的性质和原料来源不同，没有统一规范的提取和纯化工艺。这里只介绍多糖和粘多糖的一般分离纯化方法。三、糖类制品的分离纯化方法

第31页，共77页，星期日，2025年，2月5日非降解法适用于从含一种粘多糖的动物组织中提取粘多糖，提取采用的溶剂是水或盐溶液。降解法适用于从组织中提取结合比较牢固的粘多糖。如从软骨中分离提取硫酸软骨素，就是用碱处理进行降解。又如用酶处理法可提取与蛋白质结合的多糖。（1）提取方法

第32页，共77页，星期日，2025年，2月5日常用的分离方法是沉淀法和离子交换层析法。乙醇沉淀法：是从提取液中沉淀多糖的最简易方法，也适用于分级分离。4-5倍体积的乙醇可以使任何结缔组织中的粘多糖完全沉淀。用季铵化合物也可沉淀粘多糖。粘多糖的聚阴离子能与某些阳离子表面活性剂结合成不溶于水的盐，如十六烷基三甲基铵（CTA）等。（2）分离方法第33页，共77页，星期日，2025年，2月5日（1）提取方法（extraction）脂类自然状态下是以结合形式存在的。非极性脂是与其他脂质分子或蛋白质分子的疏水区相结合的。提取脂质就是要选择适当的溶剂来破坏这种结合键，将脂质溶解出来。常用的溶剂有组合溶剂，醇是其中的主要成分，此外还有氯仿、甲醇、水等。四、脂类制品的分离纯化方法

第34页，共77页，星期日，2025年，2月5日沉淀法：由于不同脂质在丙酮中溶解度不同，故常用它进行沉淀。吸附层析法：常用吸附剂有硅胶、氧化铝等。它是通过极性和离子力等把各种化合物结合到固体吸附剂上。洗脱一般是采用极性逐渐增大的洗脱液来进行，非极性的先流出，极性的后流出。（2）纯化方法

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