滤纸条降解试验 产酶条件优化方案.doc

滤纸条降解试验 吸取纤维素降解菌种子液1ml接种到装有50ml赫奇逊培养液的250ml三角瓶中，瓶中放置1cm×6cm的新华Ⅰ号滤纸条，同时设置不加菌液的滤纸条作为对照，每个处理3个重复。 置于30℃恒温摇床，200r/min振荡培养5d，观察各瓶中滤纸条溃烂情况。 赫奇逊培养液：KH2PO4 1.0g MgSO4·7H2O 0.3g CaCl2 0.1g NaCl 0.1g FeCl3 0.01g NaNO3 2.5g pH7.2～7.3 蒸馏水1000ml 纤维素酶活的测定 CMC酶活测定 取培养好的发酵液于4000r/min的条件下离心15分钟，上清液即为粗酶液。分别加入相对应菌株的粗酶液1mL，加入柠檬酸缓冲液1ml，再加入0.8%的羧甲基纤维素钠溶液1.5mL，震荡摇匀，将所有试管置于50℃的水浴锅中保温50min，保温完成后取出试管，加入2mL DNS显色剂，震荡摇匀，将各试管置于沸水浴中水浴加热5min，使DNS显色剂与还原糖充分反应，5min后取出试管用流水冷却，再用蒸馏水定容至20mL，将各试管摇匀后以葡萄糖标准曲线1号管作为对照，依次测定各菌株在紫外分光光度计540nm处的OD值，计算出平均值后，参照葡萄糖标准曲线查出还原糖的量。 FPA酶活测定 取培养好的发酵液于4000r/min的条件下离心15分钟，上清液即为粗酶液。分别加入相对应菌株的粗酶液1mL，加入柠檬酸缓冲液1ml，再加入滤纸(1cm ×6cm) 一条，震荡摇匀，将所有试管置于50℃的水浴锅中保温50min，保温完成后取出试管，加入2mL DNS显色剂，震荡摇匀，将各试管置于沸水浴中水浴加热5min，使DNS显色剂与还原糖充分反应，5min后取出试管用流水冷却，再用蒸馏水定容至20mL，将各试管摇匀后以葡萄糖标准曲线1号管作为对照，依次测定各菌株在紫外分光光度计540nm处的OD值，计算出平均值后，参照葡萄糖标准曲线查出还原糖的量。 Avicel cellulase (Avicelase) 500 uL of enzyme mixed with 1mL of Avicel (1%, w/v) for determining the Avicelase activity. 详细见给你的那篇文献 通过以上两种方法，测得复筛得到的酶活高的菌株每 8 h的粗酶酶活产酶曲线，测到72h。确定酶活达到最大的最适时间。 产酶条件优化 研究不用培养温度、pH 值、碳源、氮源、接种量、装液量对菌株产酶的影响，并在各因子最适条件下培养菌株，检测其产酶酶活。(培养的时间均为酶活达到最大的最适时间) 培养时间：生长曲线和产酶曲线 1 培养温度对产酶的影响。 将复筛得到的酶活高的菌株分别接种于5个100 mL的羧甲基纤维素培养基中（用250mL的三角瓶承装），并分别在 25、 30、 35、40、 45℃下培养，培养一定时间后，测定其CMC酶活，从而确定菌株产酶的最适温度。 2 培养起始 pH 对产酶的影响。 将复筛得到的酶活高的菌株分别接种于5 个 100 mL 羧甲基纤维素培养基中，并将其起始 pH 值分别调至 5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0。培养一定时间后，测定其 CMC 酶活，从而确定菌株产酶的最适 pH 值。 3 不同碳源对产酶的影响。 分别以CMC-Na、微晶纤维素、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、可溶性淀粉、麦麸、乳糖为碳源代替基础培养基中的碳源，添加量均为10g/L ，培养纤维素降解菌。培养一定时间后，测定其 CMC 酶活，从而确定菌株产酶的最适碳源。然后添加不同浓度(20g/L、30g/L、40 g/L、50 g/L、60 g/L、70 g/L、80 g/L)的最适碳源代替基础培养基中的碳源，培养纤维素降解菌。培养一定时间后，测定其 CMC 酶活，从而确定菌株产酶的最适碳源的最适浓度。 4 不同氮源对产酶的影响。 分别以胰蛋白胨、酵母浸粉、牛肉膏、NH4 NO3、(NH4)2SO4、NH4Cl、KNO3、NaNO3、尿素、大豆为氮源代替基础培养基中的氮源，添加量均为2g/L，培养菌株。培养一定时间后，测定其 CMC 酶活，从而确定菌株产酶的最适氮源。然后添加不同浓度(1 g/L、3g/L、5g/L、7g/L、9g/L、12g/L)的最适氮源代替基础培养基中的氮源，培养纤维素降解菌。培养一定时间后，测定其 CMC酶活，从而确定菌株产酶的最适氮源的最适浓度。 5 不同接种量对产酶的影响。 将复筛得到的酶活高的菌株分别以不同的接种量(1%、2﹪、4﹪、6﹪、8﹪、10﹪)接种于5个100 mL的羧甲基纤维素培养基中， 培养一定时间后，测定其 CMC 酶活，从而确定菌株产酶的最适接种量。 不同装液量对产