重组人成纤维细胞生长因子-21的构建、表达、纯化及功能初探的开题报告.docx

重组人成纤维细胞生长因子-21的构建、表达、纯化及功能初探的开题报告 一、选题背景和意义 纤维细胞生长因子-21（fibroblast growth factor-21，FGF21）是一种新型的脂质代谢调节因子，能够通过调节葡萄糖和脂肪酸代谢实现降低血糖和血脂的作用。近年来，FGF21因其优良的药理特性被广泛研究，被视为一种潜在的治疗肥胖症、糖尿病、高血脂等相关代谢性疾病的药物靶点。本研究将从基因重组、蛋白表达、纯化、功能鉴定等层面对FGF21进行系统研究，为其应用在临床治疗中提供理论和实践基础。 二、研究内容和方案 1. 基因重组 根据已知的人FGF21基因序列设计合成重组FGF21的启动子、信使RNA和下游多肽标签等用于重组的DNA序列，并将其克隆至重组载体上，完成用于表达的重组质粒的构建。 2. 蛋白表达 将构建好的重组质粒转染至大肠杆菌表达菌株中，诱导其表达。通过SDS和Western blot等方法检测表达的蛋白是否符合预期。 3. 蛋白纯化 利用亲和层析技术，纯化表达的重组FGF21蛋白。通过SDS、HPLC等方法检测纯化后的蛋白纯度和活性。 4. 蛋白功能鉴定 通过体外实验，检测重组蛋白对药物代谢、细胞增殖、葡萄糖和脂肪酸代谢等方面的调节作用。利用小鼠模型进一步研究重组FGF21蛋白的药理和生物学效应。 三、研究预期成果 1. 完成FGF21的基因重组、表达、纯化和功能鉴定，为其应用在临床治疗中提供理论和实践基础。 2. 揭示FGF21调节脂质代谢的分子机制，为肥胖症、糖尿病等相关代谢性疾病的治疗提供新思路和新方案。 3. 发表高水平学术论文，推动FGF21的临床应用及相关领域研究的发展。