常见的扩增活化的自体淋巴细胞技术.ppt

EAAL 扩增活化的自体淋巴细胞治疗肿瘤技术简介Introduction of EAAL Therapy 肿瘤免疫治疗的机制 Mechanisms of Cancer Immunotherapy 通过调动机体自身的免疫系统，达到控制肿瘤生长，杀伤肿瘤细胞的目的。 前提： 肿瘤细胞有别于正常细胞 肿瘤抗原 肿瘤特异性T细胞免疫应答 肿瘤特异性抗体免疫应答 天然免疫对肿瘤细胞的杀伤作用 如何达到有效的免疫治疗效果 有足够可以识别肿瘤抗原的杀伤性T细胞 机体的免疫环境有利于上述细胞发挥抗肿瘤功能 Th1/Th2 Treg 这些T细胞可以到达肿瘤组织局部 T 细胞归巢 在肿瘤局部，这些T细胞可以发挥有效的杀伤功能 肿瘤基质及肿瘤组织微环境 肿瘤疫苗 过继细胞免疫治疗 肿瘤的免疫治疗方法Approches of Cancer Immunotherapy 细胞免疫治疗Cellular Immunotherapy 包括肿瘤在内的多种慢性病的最重要的生物治疗方法之一 肿瘤的细胞免疫治疗： 非特异性 ※ LAK细胞 ※ CIK细胞 ※ EAAL细胞 特异性 ※ Provenge,树突状细胞 ※ 肿瘤特异性T细胞 - 其它慢性病的细胞免疫治疗： ※慢性病毒感染性疾病 乙肝、丙肝 艾滋病 ※慢性寄生虫感染 ※糖尿病 ※多发性硬化症 ※系统性红斑狼疮 扩增活化的自体淋巴细胞（EAAL）的定义 自体免疫细胞治疗技术 CD3+ T淋巴细胞为主（95.91%±0.24% ），含少量NK细胞 体外扩增活化 肿瘤杀伤功能 改进的LAK和CIK治疗：细胞培养效率和肿瘤杀伤能力显著增强 EAAL是Expanded Activated Autologous Lymphocytes（扩增活化的自体淋巴细胞）的简称。其定义是通过采取机体自身20-100ml静脉血，分离获得0.8-3 x 107外周血单个核细胞，经过体外无血清培养基培养，获得以CD3细胞为主的，包含CD8+ T淋巴细胞、CD4+ T淋巴细胞、CD3+CD56+ NKT细胞、NK细胞， 细胞数量在3 x 109以上的活化的混合淋巴细胞，这些细胞在体外具有明确肿瘤杀伤功能。 EAAL技术特点 使用无血清淋巴细胞培养基进行细胞培养，保证没有潜在的病源微生物感染 不需使用单采机，对患者免疫系统没有破坏作用 细胞扩增的高效性和高活性:扩增效率约为2001000倍 独特的细胞培养工艺，少量外周血即可满足多次细胞回输的要求 可与化疗联合，完全满足多个化疗疗程对细胞治疗次数和细胞治疗数目的要求，从而产生较好的协同治疗肿瘤效果。 可进行多次、高频治疗，达到最好的治疗效果 EAAL技术的临床-实验室操作流程 外周血 20-100ml 扩增及活化 回输 100ml/次，1-8次 培养及扩增14-35天 收集诱导的 杀伤细胞 EAAL的作用机制研究 自体肿瘤细胞的体外杀伤效应（IFN-γ） 培养后的淋巴细胞与顺铂以不同序贯方式联合对PLA-801D细胞的抑制率 Group inhibited rates(%) Q DDP EAAL DDP+EAAL 淋巴细胞作用前10h顺铂 淋巴细胞作用前8h顺铂 淋巴细胞作用前4h顺铂 淋巴细胞作用同时顺铂 淋巴细胞作用后4h顺铂 淋巴细胞作用后8h顺铂 淋巴细胞作用后10h顺铂 46±1.7 41.7±3.0 35.8±1.3 27.1±2.4 18.5±1.3 16.7±2.2 14.0±0.9 16.6±0.4 16.6±0.4 16.6±0.4 16.6±0.4 16.6±0.4 16.6±0.4 16.6±0.4 88.1±0.64* 88.9±0.16* 96.7±1.99* 55.8±0.33* 73.6±0.67* 66.2±0.12* 53.2±0.14* 1.602 1.732 2.080 1.424 2.297 2.169 1.885 (注：联合作用组、单顺铂组和单淋巴细胞作用组抑制率进行单因素方差分析,P0.01 *) EAL联合化疗的体外杀伤效果 EAL细胞的肿瘤抗原特异性分析 Donor 　 A2-01 A2-02 A2-03 Cancer Antigen NY-ESO-1 BC(%) 0.17 0.86 0.32 AC(%) 1.12 2.57 2.3 Multiple 6.59 2.99 7.19 MAGE-1 BC(%) 0.39 0.07 0.1 AC(%) 0.25 1.15 0.51 Multiple 0.64 16.43 5.10 MAGE-3 BC(%) 0.45 0.06 0.07 AC(%) 0.28 0.36 0.36 Multiple 0.62 6.00 5.14 MAGE-10 B